药用植物刺山柑ISSR-PCR遗传体系的建立和优化.pdfVIP

第 32卷 第 2期 2013年 2月 种 子 (Seed) Vo1．32 No．2 Fet)． 2013 药用植物刺山柑 ISSR—PCR遗传体系的建立和优化 刘 冲 ， 杨 丽 ， 杨伟俊 ， 徐建国 ， 廖晶晶 (1．新疆维吾尔 自治区药物研究所／新疆维吾尔药重点实验室， 乌鲁木齐 830004； 2．新疆医科大学药学院， 乌鲁木齐 830054) 摘要 ：对药用植物刺 山柑遗传多样性研究分析 ，建立 了刺山柑 ISSR—PCR稳定的反应体 系，利用植物基 因组试剂盒提取刺 山柑药材DNA；根据此引物采用正交实验设计考察影响PCR扩增的4个主要因素，筛选出最佳反应条件：25 LISSR— PCR的最佳浓度为 10×buffer2．5 L、引物 O．2~／moUL、模板 4On L、dNTPs0．4mmoL／L、Taq／DNA聚合酶 0．5U，利用 梯度筛选获得U808引物最佳退火温度。为利用这一分子标记对药用植物刺山柑进行遗传多样性分析奠定了基础。 关键词： 刺山柑；ISSR—PCR；正交实验 中图分类号： S567 文献标志码： A 文章编号： 1001—4705(2013)0l-0038—04 EstablishmentandOptimizationofISSR—PCR Reaction SystemsforCapparisspinosa LIUChong，YANG li一，YANGWei-jun ，XUJian-guo，LIAOJing-jing (1．XinjiangInstituteofMateriaMedica／KeyLaboratoryofXinjiangUygurMedicine，Urumqi830004，China； 2．XinjiangMedicalUniversity，UrumqiXinjiang830011，China) Abstract：GeneticdiversityofmedicinalplantsofCapparisspinosawasresearched，andISSR stablereaction system wasestablishedinthisstudy．PlantgenomicDNA kitwereusedforextractingthetotalDNA ofCapparis spinosa；accordingtotheprimersthe4mainfactorsthatcanaffectedthePCR amplificationwillbestudiedby theorthogonalexperimentaldesign，theoptimalISSR reactionwascarriedoutinavolumeof25／xLcontaining 2．5／xL10Xbuffer，primer0．2／zmol／L、templateDNA 40ng／／xL，dNTPs0．4mmol／L，TaqDNA polymerase 0．5U ，obtainingthebestannealingtemperatureofprimerU808bytemperaturegradientfilter；TheISSR-PCR experimentshasgivengoodfoundationforfurtherstudyofCappalisspinosa． Keywords： Capparisspinosa；ISSR—PCR ；orthogona1 刺山柑 CapparisspinosaL．为山柑科 山柑属植物， Mg。 、 dNTtS、DNA模板、Taq酶及引物的影响，同时不 又名野西瓜 、老 鼠瓜等，其味辛、苦，性温，具有祛风除 同物种对 ISSR反应条件 的要求存在着差异 。为了获 湿散寒的功效，维吾尔医以其干燥根皮或成熟及未成 得稳定可靠的试验结果，需对反应体系进行优化，本研 熟的果实人药，其疗效显著，用药历史悠