桑树类黄酮3–O–葡萄糖基转移酶基因的鉴定及主效基因-园艺学报.PDFVIP

园艺学报，2015 ，42 (10) ：1919 –1930. Acta Horticulturae Sinica doi ：10.16420/j.issn.0513-353x.2015-0114；http ：//www. ahs. ac. cn 1919 桑树类黄酮 3 –O –葡萄糖基转移酶基因的鉴定 及主效基因功能分析 1 1 2 1 1 1 梁燕梅 ，朱攀攀 ，李 军 ，赵爱春 ，刘长英 ，UMUHOZA Diane ， 李镇刚3 1 1,* ，鲁 成 ，余茂德 1 2 3 （西南大学生物技术学院，重庆 400715 ； 贵阳中医学院，贵州 550002； 云南省农业科学院蚕桑蜂蜜研究所，云 南蒙自 661101 ） 摘 要：根据同源比对，从川桑（Morus notabilis ）基因组数据库（/morusdb/ ）中鉴 定类黄酮 3 –O –葡萄糖基转移酶基因（MaUFGT ）家族成员。采用实时荧光定量PCR （qRT-PCR ）分析 MaUFGT 在桑树各组织和发育期的表达水平。随着果实发育成熟，MaUFGT1 、MaUFGT2 和 MaUFGT3 的表达模式相似，均呈上升趋势；在从顶芽依次向下不同叶位中，3 个 UFGT 基因表达呈现先降低后升高， 再降低又升高的趋势；在幼茎皮层和托叶中大量表达，幼茎表皮和木质部、叶柄中表达量较低，有的甚 至不表达。MaUFGT2 的表达量在 3 个基因中都是最高的，推测其是该基因家族的主效基因。从桑树品种 ‘嘉陵40 ’成熟果实中克隆了 UFGT2 基因，命名为 MaUFGT2 ，登录号 KP455729.1 。其 cDNA 全长为 1 386 bp，编码461 个氨基酸，推测蛋白质分子量约为 51 kD 。序列比对结果发现所编码蛋白在不同物种 间保守性不高。将MaUFGT2 克隆到 pET-28a(+)原核表达载体后在大肠杆菌 BL21(DE3) 中进行诱导表达， 表达产物经 SDS分析显示，融合蛋白大小约为 55 kD，主要以包涵体形式表达，在上清液中也有少 量表达。MaUFGT2 蛋白经纯化和复性后，最后通过高效液相色谱（HPLC ）分析该蛋白的酶活性，结果 表明，体外酶活性鉴定 MaUFGT2 能够催化 UDP 葡萄糖转移至槲皮素形成槲皮素 3 –β –D –葡萄糖苷， 验证了其具有糖基转移酶的功能。 关键词：桑树；果实；类黄酮 3 –O –葡萄糖基转移酶；UFGT 基因；表达；酶活性分析 中图分类号：S 663.9 文献标志码：A 文章编号：0513-353X （2015 ）10-1919-12 Identification of MaUFGTs from Mulberry and Function Analysis of the Major Gene 1 1 2 1 1 1 LIANG Yan-mei ，ZHU Pan-pan ，LI Jun ，ZHAO Ai-chun ，LIU Chang-ying ，UMUHOZA Diane ， LI Zhen-gang3 1 1,* ，LU Cheng ，and YU Mao-de 1 2 （College of Biotechnology，Southwest University ，Chong