动物细胞培养(2018.3.26).pptx

植物细胞工程植物细胞工程技术植物细胞工程应用作物新品种的培育植物组织培养植物体细胞杂交细胞产物的工厂化生产植物繁殖的新途径知识回顾动物细胞工程动物细胞工程常用的技术：动物细胞培养动物细胞核移植动物细胞融合生产单克隆抗体等最基础的是 ——动物细胞培养技术动物细胞培养技术学习目标：1、简述动物细胞培养的过程、条件及应用2、对比说出动物细胞培养与植物组织培养原理、条件、结果、培养目的生活联系： 烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治疗该病人？思考？许多动物的细胞能够分泌蛋白质，如抗体等。但是，单个细胞的蛋白质量是很少的，怎样才能获得大量的分泌蛋白呢？一、动物细胞培养1、概念：从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。2、原理：细胞增殖如何进行动物细胞培养?阅读“动物细胞培养过程”并思考1、为什么要对取出的动物组织进行处理，使细胞分散？2、用胰蛋白酶对动物组织进行处理是因为细胞间的物质主要是什么？用胃蛋白酶可以吗？3、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？4、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？5、简述动物细胞培养的操作过程。 1、为什么要对取出的动物组织进行处理，使细胞分散？ 分散的单个细胞容易摄取所需的营养，排出代谢废物；而用大块组织培养时，内部细胞的营养供应和代谢废物的排出都较困难。 2、（旁栏思考）用胰蛋白酶对动物组织进行处理是因为细胞间的物质主要是什么？用胃蛋白酶可以吗？ 细胞间的物质主要是蛋白质（胶原纤维）。 胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适宜环境pH为7.2～8.4。多数动物细胞培养的适宜pH为7.2～7.4。 3、（旁栏思考）胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？ 胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。 4、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？3、过程增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养胚胎或幼龄动物器官组织①原代培养取出组织定义：人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。剪碎胰蛋白酶处理单个细胞去掉组织间蛋白加培养液细胞悬液原代培养转入培养瓶内培养（贴壁生长长成单层细胞。有接触抑制现象）。■细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。■培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于帖附。强调一：细胞贴壁过程强调二：接触抑制细胞的接触抑制■当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。思考：如此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？②传代培养 定义： 当原代培养的细胞处于接触抑制后, 用胰蛋白酶处理,使细胞从瓶壁上脱离下来,然后加入新的培养液,将细胞分离稀释,并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内,这个过程称传代培养.（分瓶培养的过程） 原代细胞遗传物质己改变遗传物质未改变原代培养细胞贴壁接触抑制胰蛋白酶分瓶传代培养10—50代细胞(细胞株)传代培养无限传代（细胞系）强调：细胞株、细胞系（了解即可，老课本体系）　　细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40-50代，这种传代细胞为细胞株。 细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。动物胚胎或幼龄动物的组织、器官总结：动物细胞培养过程剪碎、用胰蛋白酶处理单个细胞原代培养特点：细胞贴壁、接触抑制加培养液稀释配置细胞悬液原代培养转入培养瓶细胞株：一般说遗传物质未改变分瓶传代培养传代10代以内，遗传物质不改变10代细胞传代培养传代10-50代左右，增长缓慢以至于完全停止，部分细胞核型可能发生变化（遗传物质可能改变）10-50代细胞细胞系：遗传物质已改变继续传代培养少部分细胞获得不死性，细胞突变，遗传物质已经改变，等同于癌细胞。无限传代问题探讨：多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的知识，认为体外培养动物细胞应该模拟内环境的哪些条件呢？4.动物细胞培养的条件:对培养液和所有培养用具无菌处理；培养液中添加抗生素防止培养过程中污染；定期更换培养液以清除代谢产物，防止对培养细胞造成危害。1）无菌无毒 的环境： 2）营养：液体合成培养基：糖、氨基酸、促生长因子、水、无机盐、微量元素等；通常还需加入血浆、血清等天然成分。3）温度和pH：4）气体环