一考马斯亮蓝g-250染色法蛋白质定量.pptVIP

【实验目的】 学习掌握考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的原理和方法。 【实验原理】 考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，与蛋白质结合则呈现蓝色。染料的最大吸收从465nm变为595nm，蛋白质-染料复合物具有很高的消光系数，在一定范围内，溶液在595nm 波长下的吸光度值与蛋白质的浓度成正比。因此蛋白质测定的灵敏度较高，最低检出量为1μg蛋白质。 特点： 1、染料与蛋白质的结合，大约只需2分钟，结合物的颜色在1小时内是稳定的。 2、一定范围内,溶液在595nm波长下的吸光度与蛋白质含量成正比，可用比色法测定。 3、一些阳离子，如K+、Na+、Mg 2+、（NH4）2SO4，乙醇等物质不干扰测定，但去污剂如Tritonx-100、SDS等严重干扰测定，少量的去污剂可通过用适当的对照消除。 优点： 试剂配制简单、操作简便快捷、灵敏度高、重复性好、显色迅速、干扰物质较少。 测定范围1-100μg。 【实验仪器及试剂】 1、仪器： 722分光光度计、天平、试管、 移液管（吸量管）、 离心机 2、试剂： （1）标准牛血清蛋白质溶液（ 100 μg/mL ）： ( 每实验台配制20ml ) ①???配制牛血清蛋白质储存液（250μg/mL）： 称取