基因操作实验.docVIP

实 验 报 告 [实验项目][实验目的]掌握碱裂解法提取质粒的原理了解实验中所使用的试剂的作用 [实验] 材料：含pUC19质粒的大肠杆菌、LB液体培养基 仪器：台式离心机、恒温摇床等 试剂： 溶液I 溶液II溶液III [实验原理] 碱法提取主要是利用共价闭合环状质粒与线性染色质在拓扑学上的差异来分离它们，在碱性PH，DNA变性，恢复中性时，线性染色体DNA不能准确复性，与其它大分子共沉淀，而质粒DNA却可以准确复性，留在上清中。 [实验步骤] [实验]1： 检测ＤＮA的含量及质量： 230 Abs 2.13 A-260 10mm path 0.96. A-280 10mm path 1.44 280/260 1.5 260/230 0.45 ng/uL 69.3 2：琼脂糖凝胶电泳 检测DNA分子的大小: [实验结论] 琼脂糖电泳结果显示所得的质粒 D N A的条带亮度高， 主要以超螺旋拷贝为主， 和质 粒 D N A 为 ，含量为 g ／ L ， 酶 切后得到大小约为 5 0 0 b p的基因片段。 [实验注意事项] 加入溶液2后,复性时间不宜过长,一般是5