7 植物细胞培养基配制 .pptVIP

实验7 植物细胞培养基的配制 与灭菌;目的： 学习用母液法配制MS培养基的方法 掌握培养基的灭菌方法及操作过程;电子天平、烧杯、量筒、玻璃棒、可调移液器及移液器嘴（1ml，200μl），移液器嘴盒、1.5ml EP管、药勺、称量纸、试剂瓶、滴管、pH计或pH试纸、三角瓶（100ml，250ml）、无菌培养皿、耐高温高压专用封口膜、棉线、标签纸、记号笔、高压锅。 1mol/L HCl, 1 mol/L NaOH，MS母液、蔗糖、琼脂。;培养基（A）： MS+ 0.2 mg/L 2，4-D + 3% 蔗糖（pH 5.8） 培养基（ B）: 125 ml MS+ 0.2 mg/L 2，4-D + 3% 蔗糖 ＋ 1％ 琼脂 （pH 5.8） 培养基（ C）: 125 ml MS+ 0.2 mg/L 2，4-D + 2 mg/L 6-BA + 3% 蔗糖 ＋ 1％ 琼脂 （pH 5.8）;;计算出所配培养基所需各种母液的量。（取用量＝需配培养基的体积/母液的扩大倍数） 将所需的各种储存母液按顺序放好，准备好蒸馏水、各种洁净器皿（烧杯、量筒、玻璃棒、可调移液器、枪头）。培养基的成分比较复杂，为避免配制时忙乱而将一些成分漏掉，可以准备一份配制培养基的成分单，将培养基的全部成分和用量填写清楚。配制时，按表列内容顺序，按项按量称取，就不会出现差错。 按需取各种母液置于500ml烧杯中，加300ml左右的蒸馏水，再加15g蔗糖，加热搅拌溶解。加入100 μl 1mg/ml的2，4-D，加蒸馏水定容至500ml。调节pH值后，分装250mL即为培养基A；剩余用于固体培养基配置的250ml再平均分装到两个200 ml的三角瓶中（即B与C），每瓶125mL。B中加入琼脂1.25g; C中加入250 μl 6-BA和1.25g琼脂。 使用pH计或pH试纸，以1mol/L HCl或NaOH 调pH至5.8-6.0。 将配制的液体培养基（A）装入500或1000ml三角瓶中，用耐高温高压的封瓶膜封好。贴上标签，用记号笔注明组别、配置日期，准备消毒。 需配制成固体培养基的，再称取并加入琼脂（B、C中各加入1.25g），用耐高温高压的封瓶膜封好，准备消毒。; 准备4个100-250ml的三角瓶，洗净凉干后，用耐高温高压的封瓶膜封好；准备好移液器头(1ml, 200?l)，装入移液器嘴盒(或烧杯），用牛皮纸包裹；（准备好干净的EP管，装入烧杯，用牛皮纸封口；）将需要用到的镊子等不锈钢器具用牛皮纸包裹；;实验操作步骤示意图如下：;叙述并分析实验过程中应注意的???题和要点。