GB/T 18638-2002流行性乙型脑炎诊断技术.pdf

CB/r18638--2002 前 台 流行性乙1qj脑炎又称日本乙型脑炎((JapaneseBencephalitic)，是山流行性乙NUR炎病毒引起的一 种蚊媒性人兽共患传染病 成年动物和人常呈隐性感染，幼龄动物特别是马感染后，可发生脑炎症状。妊 娠母猪可引起流产、死胎及木乃伊胎，公猪翠丸肿大，儿童可发生严重的脑炎。多发生于7-9月份。我 国许多省(Ili)都有本病发生，特别是六t-f年代，发病率最高。对人畜的健康可造成严重的威胁 世界 动物卫生组织和日本的资料，都采用病毒分离鉴定、免疫荧光试验、血凝抑制试验、补体结合试验、血清 中和试验等进行诊断 我国对木病的研究报道较多，而比较常用的诊断方法仍是本标准规定的病毒分离 鉴定、血凝抑制试验、补体结合试验 病毒分离鉴定适用于流行性乙型脑炎新疫区的确定和病畜的确诊。 间接免疫荧光试验适用于可疑流行性乙型脑炎病毒标本的快速检测和病毒分离株的初步鉴定。补体结 合试验，由于补体结合抗体一般在病后2-3周出现，5-6周达高峰，并可维持1年以L，故可适用于流 行性乙A9脑炎的较早期诊断和流行病学调查，是最常用的方法。根据当时的实际需要，可任选一种或两 种检疫方法。以达到准确诊断的 卜!的。 本标准的实施，对提高乙型脑炎的诊断和疫情预测水平，及时采取防制措施，保证人畜健康，将起到 重要的作用。 本标准的附录A、附录B都是标准的附录 本标准由，!，华人民共和国农业部提出。 本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位:中国人民解放军农牧大学。 本标准主要起草人 :李佑民、宣华、李金中、刘振润。 中华 人 民共 和 国 国家 标 准 流行性乙型脑炎诊断技术 GB/r18638--2002 DiagnostictechniquesforepidemicencephalitisB 范围 本标准规定了流行性乙型脑炎的病毒分离与鉴定、间接免疫荧光试验、补体结合试验、血凝抑制试 验等技术要求 本标准适用于l-1岸、产地及集散地、饲养单位(或个人)的猪、马、骡、驴、牛、羊等的流行性乙型脑炎 的诊断和检疫 2 病毒的分离与鉴定 2门 材料准备 2门门 器材:细胞培养瓶 或〔管)，吸管.中试管，三角烧瓶，37C水浴箱,37C恒温箱，普通冰箱及低温冰 箱，离心机及离心管，研磨器械，普通光学显微镜，G5级玻璃滤器，孔径。.45lam的微孔滤膜，0.25mL 注射器及针头。 2.1.2 试剂:汉克氏(Hanks)4,0.5%水解乳蛋白Hanks液，2万工U/m工青霉素液，2万Ixg/ML.链霉 素液，7%碳酸氢钠液,1%胰蛋白酶液,1%酚红(中性)液，伊格尔氏(Eagle)最低必要成分培养液 (EMEM)，小牛血清 2.1.3 小动物:小鼠(6g-8g)、乳鼠 2门.4 鸡胚细胞、绿猴肾传代细胞(Vero)、仓鼠肾传代细胞(BHK,,)、白蚊伊蚊C6/36传代细胞等。 2-2 病毒分离 2.2门 样品的采取和运送 2.2门门 在流行的早期和发病的早期(即病毒血症阶段)，无菌采取病畜的血液或脑脊髓液。 2.2.1.2 应在病畜死亡后3h内(越早越好)采取脑组织(选大脑皮质、脑干、中脑、海马回及桥脑)数小 块放于灭菌玻璃瓶 2.2.1.3 猪应采取流产死胎的脑组织，置冰箱内立即送检 2.2.1.4 不能立即检查者，应放一25C一一30C冰箱，或加50%甘油生理盐水，4C保存送检 2.2.2 样品的处理 2.2-2.1 血液应分离出血清或血浆。 2.2.2.2 脑脊髓液可直接应用。 2.2.2.3 脑组织应研磨成糊状，加入0.5%水解乳蛋白Hanks液(或碱性肉汤或 10%脱脂奶生理Sh 水)，制成 10写悬液，3000r/min离心 30min，吸取上清液，加入青霉素 500IU/ml和链霉素 500pg/ml，在4C处理3h-4h无污染者可不加青、链霉素处理)，即得接种样品。 2.2-2.4 怀疑有污染的样品，也可用。.45lam微孔滤膜过滤法处理。 2.2.3 动物分离法 2.2-3.1 取6g-8g小鼠10只(或3-5日龄乳鼠 一窝)，用左手固定，在耳与眼之间用碘酒消毒 右手 持吸取接种样品的0.25ml·注射器在消毒部刺人硬堕些互旦生生二竺生燮丝垫些二生鱼塑 中华人民共和国国家质f监