大鼠GROCINC-1ELISA检测试剂盒说明书.docVIP

大鼠GRO/CINC-1 ELISA检测试剂盒 日本IBL进口原装 货号:27162 规格：96T 前言简介 细胞因子诱导中性粒细胞化学趋化因子1(CINC-1)最初是通过白介素1β刺激大鼠肾上皮细胞(NRK-52E)纯化提取的.1989年时, 富山医科药科大学的Watanabe团队鉴别出了大鼠CINC-1的氨基酸序列.CINC-1是CXC趋化因子亚族的一员.另外其它几种大鼠CXC趋化因子(CINC-2α, CINC-2β, CINC-3/MIP-2)的序列也被鉴别出来,大约有63 - 67%的氨基酸序列与CINC-1的相同.此外, GROα, GROβ与GROγ也分别有68%, 71%,69%与CINC-1序列一致.这表明CINCs是人GROs的大鼠相似物. 原理 此试剂盒运用了两种特异性抗体,洗板后加入TMB底物液显色,显色的强度与样品中大鼠GRO/CINC-1的量成正比. 检测范围 4.69 ~ 300 pg/mL 预期用途 ■此IBL试剂盒能用于大鼠血清,EDTA血浆,细胞上清中GRO/CINC-1的定量检测 ■重组和天然的大鼠GRO/CINC-1都可以检测. 试剂盒成分 1 预包被板: 抗大鼠GRO/CINC-1兔子IgG,亲合纯化 96T 2 酶标记抗体: (30倍浓缩)HRP标记抗大鼠GRO/CINC-1兔子IgG,亲合纯化 0.4mL x 1 3 标准品: 重组大鼠GRO/CINC-1 0.5mL x 2 4 EIA缓冲液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 30mL x 1 5 标记抗体稀释液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 12mL x 1 6 显色剂: TMB底物液 15mL x 1 7 终止液: 1N硫酸 12mL x 1 8 浓缩洗涤液: (40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1 操作说明 1实验所需器材(但试剂盒没有提供) 酶标仪(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及烧杯 蒸馏水 冰箱(4°C) 坐标纸(log/log) 吸水纸 试管(用于标准品稀释) 温育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性试剂管(用于浓缩酶标记抗体和显色剂) 2准备 洗涤液的准备 试剂盒的洗涤液是一种40倍浓缩液,用1950 mL蒸馏水稀释50 mL的浓缩洗涤液,制成2000mL即用稀释洗涤液. 置于冰箱内可保存2周. 酶标记抗体的准备 试剂盒中的标记抗体是一种30倍浓缩物,根据所需量,用标记抗体稀释液稀释30倍. 示例: 如果你用一条板(8孔),就需800 μL.的标记抗体.就用870 μL的标记抗体稀释液稀释30 μL抗体浓缩液,充分混匀.并每孔各加100 μL 浓缩酶标记抗体需稀释后才能用于实验 剩余的稀释标记抗体液需密封瓶装,存于4°C 标准品的准备 加0.5 mL的蒸馏水到瓶装标准品,制成浓度为600 pg/mL大鼠GRO/CINC-1标准品液 标准品的稀释 准备8支试管,并每支各加230 μL EIA缓冲液.稀释成如下浓度,步骤如下图所示: 试管1 300 pg/mL 试管2 150 pg/mL 试管3 75 pg/ mL 试管4 37.5 pg/mL 试管5 18.75 pg/mL 试管6 9.38 pg/mL 试管7 4.69pg/mL 试管8 0 pg/mL(样品空白对照) 吸取230ul的标准品液于1号管混匀，然后从1号管吸取230ul加入2号管混匀，如下图所示,按此规律稀释，第8号管为0 pg/mL作为样品空白对照 样品稀释 样品如需稀释时,必须用EIA缓冲液进行稀释 如果样品中大鼠GRO/CINC-1的浓度范围一无所知的话,预先准备几个不同稀释梯度的样品液来确定最佳的检测浓度. 3实验步骤 使用前，将所有试剂应平衡至室温，大约30min，充分混匀，确保试剂质量无改变，标准曲线和样品检测必须同时进行. 试剂 待检测样品 标准品 样品空白 试剂空白 检测样品100ul 稀释标准品（1-7管）100