真菌的实验诊断2008.08.26——胡主任培训讲解.pptVIP

液基稀释法 CLSI M27A2：致病性酵母菌 CLSI M38A：产孢丝状真菌 琼脂稀释法 纸片扩散法——CLSI M44-A E－test法 抗真菌药物体外敏感试验 E-test法：可用于酵母样真菌和丝状真菌 096 白色念珠菌 近平滑念珠菌 热带念珠菌 光滑念珠菌 白色念珠菌 近平滑念珠菌 热带念珠菌 光滑念珠菌 白色念珠菌 近平滑念珠菌 热带念珠菌 光滑念珠菌 白色念珠菌 近平滑念珠菌 热带念珠菌 光滑念珠菌 白色念珠菌 近平滑念珠菌 热带念珠菌 光滑念珠菌 白色念珠菌 近平滑念珠菌 热带念珠菌 光滑念珠菌 体外抗真菌药敏试验与体内疗效 90-60原则—MIC值与临床疗效 药敏试验敏感菌株：90%对治疗有效 药敏试验耐药菌株：60%对治疗有效 Mahmoud A.G, JCM 1996, 34:489-495；Rex J,CID 2002, 35: 982-989 真菌特异性抗原的免疫学检测 1 (1-3)-?-D-葡聚糖 2 半乳甘露聚糖 3 甘露聚糖 4 D- 阿拉伯糖醇 5 烯醇化酶 6 新生隐球菌荚膜抗原 (1-3)-?-D-Glucan(葡聚糖) “G”试验 (1-3)-?-D-Glucan生物活性 (1-3)-?-D-Glucan作为真菌细胞壁成分之一，一旦进入机体后，将引起真菌病，严重时将会引起严重的深部真菌感染疾病，因此,深部真菌感染对患者的健康与生命构成严重威胁. 传统检测方法为真菌培养，一是周期长，二是阳性率特别低． 主要是抗生素类药物的滥用所引起． 真菌感染出现逐渐上升趋势． “G”试验缘何而来？ 比浊法反应机理 细菌内毒素 （1-3）?-D-Glucan LAL-RM(反应物) 因子C 活化因子C ? 因子B 活化因子B 活化因子G 因子G ?  凝固酶原 凝固酶 ? ? 凝固蛋白原 凝固蛋白（凝胶） 定量浊度仪 Turbidimetric technique GEL G 试验 1-3-β-D-Glucan 葡聚糖存在于念珠菌、曲霉等的细胞壁中，能特异性激活G因子，从而激活鲎试验，此过程称为G试验。 口咽部念珠菌病G试验结果阴性 隐球菌,毛霉菌感染G试验假阴性 (1→3)-β-D-葡聚糖检测 是酵母菌及丝状真菌细胞壁上的一种成分 内毒素检测方法 应用范围：曲霉菌、念珠菌、镰刀霉、毛孢子菌、酵母菌、足分支菌 隐球菌、毛霉菌除外 已在美国FDA以及一些欧洲国家得到批准 (1→3)-β-D-葡聚糖检测 美国主要针对念珠菌血症进行了研究 需要更多有关其它感染的研究信息（侵袭性曲霉菌病） 没有真菌感染的患者血液中也会出现β-D-葡聚糖： - 血液透析 - 使用血制品（白蛋白、丙球） - 使用含有葡聚糖的纱布 临床上阳性结果出现较晚 使用某种抗生素是否会导致假阳性？ G试验商品化试剂盒 detects in one hour 1 天津滨海新区金山川公司生产产品 2 Fungitec-G glucan (Seikagaku) Obayashi 1992 cutoff ： 20pg/ml 3 FungitellTM Assay (Associates of CAPE COD) cutoff ：80 pg/ml 1 输注白蛋白或球蛋白 2 血液透析(纤维素滤膜） 3 输注抗肿瘤多糖类药物 4 使用磺胺类药物 5 外科手术后早期 6 标本接触纱布 G试验假阳性问题 酵母菌、丝状真菌细胞壁成分 不仅检测曲霉菌，还可以检测念珠菌、镰刀菌、毛孢子菌、支顶孢属 不能检测：隐球菌和接合菌 美国FDA已批准，欧洲部分国家已注册 敏感性、特异性：90％左右 ?－D－葡聚糖的价值 ?－D－葡聚糖（G试验）的缺陷 　标本采集 　不能鉴定何种真菌感染 ?－D－葡聚糖参考值 健康人： 　　 10 pg/ml 可疑感染：10 ~ 20 pg/ml 深部真菌感染： 20 pg/ml The cutoff of G test Cutoff (pg/ml) Sensitivity (%) Specificity (%) 60 69.9 87.1 80 64.4 92.4 Clinical Infectious Diseases 2005;41: 654-9 The cutoff of G test 曲霉菌半乳