重组体克隆的筛选和鉴定教学教案.pptVIP

;第七章 重组体克隆的筛选和鉴定;转化子与筛选的概念;筛选方法的类型;2. 间接筛选;一般克隆与筛选策略;第一节 载体表型选择法 第二节 根据插入基因的表型选择 第三节 DNA电泳检测法 第四节 核酸杂交检测法 第五节 免疫化学检测法 第六节 转译筛选法 第七节 几种常见的真核生物重要基因选择方法;一、抗药性标记及其插入失活选择法;（1）四环素：;3. 选择过程：;;（2）氨苄青霉素抗性插入失活选择过程;二、?-半乳糖苷酶显色反应选择法;2. 选择过程;;利用插入的外源基因的表达产物特性进行直接选择。（只在特定条件下）。;例：;利用有插入片段的重组载体的分子量比野生型载体分子量大。;二、酶切电泳筛选法;A;筛选过程;三、PCR扩增检测法;1. 核酸杂交;二、核酸杂交检测方法;酶切前;（1）菌落原位杂交筛选;;（2）R-环检测法;缺点：需要电镜！;2. Northern blotting;利用抗体作为“探针”来检测转入受体菌并且表达出相应的蛋白质的外源基因。;待测基因 产物蛋白;2. 放射性抗体检测法过程;二、免疫沉淀检测法;对于不能被分泌到菌体外的蛋白质可先进行原位溶菌处理（溶菌酶、原噬菌体诱发）。;三、酶联免疫吸附测定（ELISA）;待测基因 产物蛋白;2. ELISA检测的一般步骤;加入一抗，反应后冲洗掉未结合的抗体。;加入二抗，与一抗结合后再将未结合的二抗冲洗