重组体的筛选和鉴定教学教案.pptVIP

;8 重组体的筛选和鉴定;;;1 抗药性标记及其插入失活选择法;pBR322;;;选择过程：;;氨苄青霉素抗性插入失活选择过程;;2.蓝白斑筛选法;假阳性： 如果插入的外源DNA正好是3的倍数并且没有中止密码；（不破坏?肽）。;β-半乳糖苷酶显色反应筛选法;;蓝白菌落;;噬菌斑(plaque);筛选植物转化细胞常用的报告基因;（1）大肠杆菌的β-D-葡萄糖苷酸酶 （β-D-glucuronidase，GUS）； （2）细菌和萤火虫的荧光素酶 （luciferase）； （3）水母绿色荧光蛋白（GFP）基因 （Green Fluorescent Protein）。;几种报道基因的作用原理;Fireflies emit light catalyzed by luciferase with ATP;转入萤火虫的luciferase的烟草;GFP- Kac的狗 ;;④β-葡萄糖酸酶基因（GUS）;⑤萤火虫荧光素酶基因（LUC）;⑥抗除草剂bar基因;⑦冠瘿碱合成酶基因;在植物转基因研究中采用的氯霉素乙酰转移酶(Cat)基因和新霉素磷酸转移酶(NptⅡ)基因也可用于哺乳动物转基因细胞的筛选。 常用的标记基因还有： -- 胸腺核苷激酶基因（TK） -- 二氢叶酸还原酶基因（DHFR） -- 黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因（XGPRT） ;