温和过甲酸氧化辅助酶解结合液质联用技术鉴定大鼠大脑皮层质膜.PDF

15 卷 3 期 生命科学研究 灾燥造援员5 晕燥援3 圆园11 年6 月 蕴蚤枣藻 杂糟蚤藻灶糟藻 砸藻泽藻葬则糟澡 Jun. 圆园11 和过甲酸氧化辅助酶解结合液质联用 技术鉴定大鼠大脑皮层质膜蛋白质 锐 宋 琴 陈 平 梁宋平 王贤纯* ， （湖南师范大学 命科学学院 中国湖南 长沙 410081 ） 摘 要 由于膜蛋白质尤其是内在膜蛋白的强疏水性 分析和鉴定质膜蛋白质仍然是以质谱为基础的蛋白质 组学的方法中的一个难点. 过甲酸氧化是一种应用广泛的打开二硫键的方法 温和的过甲酸试剂能完全的将 半胱氨酸转化为半胱磺酸 将甲硫氨酸转化为甲硫氨酸砜 从而使目的蛋白更易溶于水介质. 采用蔗糖密度 梯度离心法纯化得到大鼠大脑皮层质膜 提取的质膜蛋白质经温和过甲酸氧化处理后经胰酶酶解消化得到肽 段 利用LC鄄MS/MS 对所得肽段进行质谱分析 采集的原始数据用Mascot 软件进行库搜寻鉴定. 此方法是研 究质膜蛋白质的新方法 温和过甲酸氧化显示出很好的氧化效果却避免其它不利于鉴定的副反应. 从大鼠大 脑皮层膜提取物共鉴定出220 种蛋白质 其中73 种为整合膜蛋白 证明对质膜蛋白质直接进行温和过甲酸 氧化然后酶解的方法辅助酶解可以有效的鉴定质膜蛋白质. 关键词 温和过甲酸氧化曰 串联质谱曰 膜蛋白曰 蛋白质组学 中图分类号 Q955 文献标识码 A 文章编号 1007鄄7847 渊2011 冤03鄄0218鄄05 Analysis of the Rat Cerebral Cortex Plasma Membrane Proteins by Mild Performic Acid Oxidation assisted Digestion Coupled to LC MS/MS CAO Rui ，SONG Qin ，CHEN Ping ，LIANG Song鄄ping ，WANG Xian鄄chun * （College of L if e Sciences ，H unan Normal Unive rs ity ，Changsha 4 10081 ，H unan ，China） Abstract ：The low abundance and the hydrophobic nature of their transmembrane domains make them diffi鄄 cult to analyze. Mild performic oxidation was explored as a method for sample pretreatment in membrane proteomic. Performic acid oxidation ，a well鄄known method for cleave the disulfide bond can oxidizes methio鄄 nine to methionine sulphone and cysteine to cysteic acid and make the oxidized protein more hydrophilic. The purified rat cerebral cortex plasma membrane proteins were oxidized by mild performic acid directly before hydrolysis by trypsin. The obtained peptides were analyzed by LC鄄MS/MS. The gentle performic acid oxidation assisted digestion methods shows goo