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30年来的全人抗体的尝试 鼠骨髓瘤不适合与人B细胞融合 -稳定性差 -抗体产量低 非洲淋巴细胞瘤病毒 (EBV) 保存抗体分泌细胞 -细胞株不稳定 -抗体的产量低 -不能特异性地保存抗体分泌细胞 很难获得人类骨髓瘤细胞株 全人抗体技术的最新突破 成功建立人骨髓瘤细胞系，人源抗体的研究进入新的里程 用途：能稳定的保持人B细胞分泌抗体的能力 发明人：英国剑桥大学的Dr.Karpas教授 意义： 1 在整体水平上研究人类产生的抗体 2 开创人类抗体基因组学的研究 评价： 诺贝尔奖得主Dr.Milstein 推荐发表 在PNAS，世界权威杂志“科学”发表了 新闻评述，剑桥大学开了新闻发布会 人－人杂交瘤技术 开发针对未知抗原的全人治疗用抗体的唯一技术 分离、保存稳定分泌天然抗体的B细胞先进方法。 寻找新型肿瘤相关抗原的捷径 人－人杂交瘤技术的优势 （1）迅速高效的生产天然人类单克隆抗体 抗原选定和抗体产生都由人类免疫系统完成， 不会引起自身免疫反应，与人体免疫系统配合良好 能获得最佳亲和力和中和活性的抗体 更合理的自然选择药物设计方式 加速抗原的发现和抗体的开发过程 人－人杂交瘤技术的优势 （2）简便、低费用的抗原抗体研究生产方式 与其他抗体改良技术相比操作更简便 起始抗体分泌水平较高，可直接用于工业规模生产 避免了改良技术引起的抗体失活 无需发现抗原和对抗原进行功能确定 人－人杂交瘤技术的优势 （3）唯一研究全人抗体图谱的技术。 确定人类免疫识别系统，确定人类免疫系统在不同的生理、病理以及发育条件下得到的抗体图谱。 （4）研究癌症免疫学和抗原基因组的最新技术。 寻找人类癌症抗原，将找到的抗原作为癌症疫苗和抗体药物开发的靶标。 人－人杂交瘤技术的优势 （5）开发针对已知抗原的第二代全人抗体产品，如HERE-2/neu, TNF,以及感染性疾病如乙型肝炎病毒, HCV和HIV （6）与其他细胞融合，产生杂交瘤，制造其他有用的人类蛋白质。 未来单抗开发的完美方案 从已知治疗靶子生产高亲和力全人抗体 全人抗体挑战靶分子的筛选 开发未知抗原的治疗用抗体 人-人杂交瘤技术的应用 1.癌症： 抗肝癌单克隆抗体 抗乳腺癌单克隆抗体 抗肺癌单克隆抗体 抗结肠癌单克隆抗体 2.病毒性疾病： 乙型肝炎病毒单克隆抗体 丙型肝炎病毒单克隆抗体 艾滋病病毒单克隆抗体 治疗乳腺癌曲妥珠单抗药物 我国第一个基因重组人源化单克隆抗体药物－泰欣生（尼妥珠单抗） 治疗直肠、结肠癌的贝伐单抗 瑞士罗氏生产的安维汀 需要整合的技术平台 蛋白组学 蛋白芯片、2维-电泳技术 免疫组学 组织信息学 细胞阵列技术 组织微阵列技术 人－人杂交瘤 人-人杂交瘤与肿瘤相关抗原 癌症免疫组学 癌症患者免疫反应的全过程 癌症抗原和抗体库 SEREX 重组cDNA表达文库血清分析 确定可能作为癌症疫苗的靶抗原 确定能够作为抗体靶向的抗原 经典方法认识的肿瘤相关抗原再认证 HERE-2/neu, CEA, AFP (甲胎球蛋白), MAGE, P53，CA125…… 肿瘤相关抗原制备的单克隆抗体的应用 基因组、蛋白质组和抗体组 基因组 蛋白质组 抗体组 50,000 10 to 20 million 100 millions genes distinct proteins antibodies Antibodomics Proteomics Genomics 思考题: 单克隆抗体的定义和它的不足 基因工程抗体有那些类型 如何制备杂交瘤细胞 * * 抗体类型 商品名 应用 鼠源单克隆抗体 Orthoclone 器官移植排斥 嵌合抗体 Peopro 冠状动脉成形术，心绞痛 嵌合抗体 Rituxan B细胞型非霍奇金淋巴瘤 嵌合抗体 Simulect 器官移植排斥 嵌合抗体 Remicade 回肠炎，类风湿性关节炎 人源化抗体 Zenapax 器官移植排斥 人源化抗体 Synagis 婴儿呼吸道合胞病毒 人源化抗体 Herceptin 乳腺癌 人源化抗体 Campath 慢性淋巴细胞白血病 人源化抗体偶联物 Mylotarg 急性复发骨髓白血病 鼠源抗体放射性偶联物 Zevalin B细胞型非霍奇金淋巴瘤 Fv ScFv 单域抗体 最小识别单位 Fab 3 小分子抗体 由完整的轻链和Fd组成，大小为完整分子的1/3。 把Fab与细菌的前导肽相连，在前导肽的作用下Fab进入周质腔，装配折叠后，它具有结合抗原的活