【2018年整理】孕酮检测作业操作全过程.doc

天马行空官方博客：/tmxk_docin ；QQ:1318241189；QQ群：175569632 1 原理 本方法是酶联免疫分析技术与磁性微粒分离技术相结合的一种测定法，并使用一种高亲和力的多克隆抗体作试剂。标本、标准与质控液的孕酮与确定量的孕酮荧光素标衍生物与限量的标有一种酶的孕酮单克隆抗体竞争结合。本法还采用一种特殊试剂将孕酮从性激素结合蛋白中置换出来，来测定流动孕酮的总量。被抗体结合的孕酮荧光素标衍生物的量与样品中孕酮的含量成反比。37℃孵育15分钟后，加入偶联有磁性微粒的抗荧光素抗体，其快速而特异地与荧光素孕酮和抗孕酮抗体的复合物结合，不需离心，在磁场中沉淀。倒去上清液，洗涤沉淀物，加入一种酶基质液，37℃孵育15分钟后，加终止液结束酶反应。然后用分光计测量酶反应所生颜色的浓度。酶反应所生颜色的浓度在测定的工作范围内与样品中孕酮的浓度成反比。标本或质控液中孕酮的含量就可用内推法直接从标准曲线中求得。 2 设备和材料 2.1 BIOCHEM孕酮测定试剂盒 2.2 37℃电子恒温水浴箱、BIOCHEM I型酶标读数仪、搅拌或震荡器 2.3 移液器及吸头、100毫升量筒、塑料试管、蒸馏水及吸水纸 2.4 磁性分离器 3 准备 3.1 将试剂盒及标本从冰箱中取出，于室温平衡30分钟。并轻轻摇匀试剂及标本。 3.2 仔细阅读说明书，根据待测标本数及试剂盒要求的质控数、标准品数设计加样蓝图及实验模式。 3.3 检查孵箱或水浴箱温度（37℃）及移液器的准确性。 4 操作 4.1 按照试剂盒说明书规定的操作步骤进行检测。洗液配制，标准曲线绘制、质控参考等。 4.2 加标本、标准、质控时要注意，冻融或长期存放的标准、标本、质控血清加样前要混匀，有絮状沉淀时应离心取上清液或过滤絮状物。 4.3 每个样品应进行双管检测，试管及吸嘴一次性使用。 4.4 未用完的试剂及时放回冰箱，于有效期内使用。 4.5 配制溶液 4.5 1配制洗液：用蒸馏水或去离子水将14.3毫升的清洗浓缩液稀释至100毫升，彻底混匀，稀释后2-8℃储存，用至失效期。 4.5 2 配制底物液及注意事项：按试剂盒原装液使用。使用时若发现颜色改变或有絮状沉淀禁止使用。 4.5 3 终止液的配制：硫酸具有腐蚀性，加样时避免接触皮肤及眼睛。按试剂盒原装液使用。 4.5 4 显色液：每管底物溶液300微升于37℃水浴培养30分钟，然后加1000微升终止液终止反应。 4.6 终止显色后，应静置于磁性分离器上至少10分钟，务必于2小时内读取全部吸收率。 4.7 结果计算：通过酶标读数仪读取标准液吸收率及浓度，绘制标准曲线，读取标本、质控液的吸收率及浓度值，综合质控液值、标准曲线上的截距、斜率、最大值与最小值等各参数的情况，以确定本次结果的可靠性、准确性。 4.8 从酶标仪读取孕酮的浓度即每个检测标本的浓度，然后对号入座地将其填写在报告单上。 5 工作流程 取出试剂盒及冷藏的血清标本复温30分钟 设计加样蓝图 加入标本稀释液100微升 加入标本、标准及质控液50微升 加入抗孕酮荧光素标衍生物200微升 加入抗孕酮抗体200微升 37℃孵育15分钟 加入磁性分离液200微升孵育37℃5分钟 置磁性分离器上2分钟，弃上清液 加入洗涤液500微升，置磁性分离器上2分钟，弃上清液 加酶基质液300微升，37℃孵育15分钟 加终止液1000微升 酶标仪比色取读数，绘制标准曲线 读取结果 6 完成试验 6.1 未用完的试剂盒放回冰箱。 6.2 关闭酶标读数仪。 6.3 处理各种废物、试管、吸嘴。 6.4 保存好标本准备作其他项目测定。 7.检验报告： 8.附录 8.1 厂商说明书。 8.2 试剂盒项目质控数据对照表。 9记录 9.1 结果记录 9.2 检验报告单 编写人 卢卓锦 日期 2004年3月25日 生效日期 审核人 阴继霞 日期 2004年4月25日 批准人 武大林 日期 2004年6月18日