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生物工程下游技术-第二章-发酵液预处理.ppt
第二章 发酵液的预处理和固液分离 1、降低液体粘度 (1)加水稀释法 加水稀释法能降低液体粘度,但会增加悬浮液的体积,加大后继过程的处理任务。而且,单从过滤操作看,稀释后过滤速率提高的百分比必须大于加水比才能认为有效,即若加水一倍,则稀释后液体的粘度必须下降50%以上才能有效提高过滤速率。 (2)升高温度 加热是发酵液预处理最简单最常用的方法。加热可有效降低液体粘度,提高过滤速率。同时,在适当温度和受热时间下可使蛋白质凝聚,形成较大颗粒的凝聚物,进一步改善了发酵液的过滤特性。 对于粘度较高的发酵液,稀释或者加热可以降低发酵液黏度,有利于输送和过滤等后续操作。史鹏等的研究比较了热处理和酸处理两种方法对HA 分子量降低的影响。 注意加热温度与时间,不影响产物活性和细胞的完整性。 温度过高或时间过长,会使细胞溶解,胞内物质外溢,增加发酵液的复杂性,影响其后的产物分离与纯化。 2.调整pH 通过调整pH值改变易吸附分子的电荷性质,即可减少堵塞和污染;细胞、细胞碎片及某些胶体物质等在某个pH值下也可能趋于絮凝而成为较大颗粒,有利于过滤的进行。 第二节 固液分离工程及设备 2)双水相萃取 向水相中加入溶于水的某些高分子化合物(如葡聚糖、聚乙二醇等)后,形成密度不同的两相,轻相中富含某种高分子化合物,重相中富含盐类或另一种高分子化合物,从而达到分离和提纯某种高分子化合物的目的。 3)吸附法 向细胞碎片悬浮液中加入某种固体吸附剂,或者用细胞碎片悬浮液通过装有吸附剂的固定床,即可达到除去细胞碎片的目的。主要的问题是很难选择合适的吸附剂,以保证目的产物不被吸附而损失。 思考题 微生物发酵液有什么特性? 解释絮凝和凝聚。 发酵液中主要的高价无机离子如何去除? 杂蛋白的去除方法有哪些? 微生物发酵液中含有大量菌体、细胞或细胞碎片以及残余的固体培养基成分。 过滤就是将悬浮在发酵液中的固体颗粒与液体进行分离的过程。 在过滤操作中,要求滤速快、滤液澄清,并且有高的收率。 2. 过滤 A. 根据过滤机理,过滤操作可分为澄清过滤和滤饼过滤 澄清过滤 ※过滤介质为硅藻土、砂、颗粒活性炭、玻璃珠、 塑料颗粒等 ※适合于固体含量少于0.1g/100ml、颗粒直径在5- 100um的悬浮液的过滤分离,如河水、麦芽汁、酒类和饮料等的澄清。 滤饼过滤 ※过滤介质为滤布 ※包括天然或合成纤维织布、金属织布、玻璃纤维纸、 合成纤维等无纺布。 ※适合于固体含量大于0.1g/100ml的悬浮液的过滤分离。 ※按推动力不同分四种:重力过滤,加压过滤,真空过滤,离心过滤。 菌种:真菌,放线菌,细菌 培养基:黄豆,花生,淀粉,后期加油,培养基未用完 发酵时间:菌丝自溶前放罐 黏度(发酵液) 影响过滤的因素 B. 常用过滤设备 (1)板框压滤机 优点 过滤面积大,结构简单,价格低,动力消耗少, 对不同过滤特性的发酵液适应性强。 缺点 不能连续操作,设备笨重,劳动强度大,卫生条件差,非过滤的辅助时间较长。 广泛应用于培养基制备的过滤及霉菌、放线菌、酵母菌和细菌等多种发酵液的固液分离。适合于固体含量1-10%的悬浮液的分离。 操作注意点 尽量使工作时间和辅助时间接近; 降低滤液粘度 (2)真空转鼓过滤机 1)切向流过滤(Cross-Flow Filtration)又称错流过滤 交叉过滤和十字流过滤,是一种维持恒压下高速过滤的技术。其操作特点是使悬浮液在过滤介质表面作切向流动,利用流动的剪切作用将过滤介质表面的固体(滤饼)移走。 3. 其他固液分离方法 * * 目的 不仅在于分离细胞、菌体和其它悬浮颗粒(细胞碎片、核酸和蛋白质的沉淀物), 还希望除去部分可溶性杂质和改变滤液的性质,以利于后继各步操作。 采用絮凝或凝聚的方法,设法增大悬浮液中固体粒子的大小,提高其沉降速度; 或采用稀释、加热等方法降低黏度,以利于过滤。 第一节 发酵液的预处理 一、发酵液过滤特性的改变 微生物发酵液的成分极为复杂,其中除了所培养的微生物菌体及残存的固体培养基外,还有未被微生物完全利用的糖类、无机盐、蛋白质,以及微生物的各种代谢产物。 微生物发酵液的特性为: 发酵产物浓度较低,大多为1-10%,悬浮液中大部分是水; 悬浮物颗粒小,相对密度与液相相差不大; 固体粒子可压缩性大; 液相粘度大,大多为非牛顿型流体; 性质不稳定,随时间变化,如易受空气氧化、微生物污染、蛋白酶水解等作用的影响。 改善发酵液过滤特性的物理化学方法: 调酸(等电点)、热处理、电解质处理、添加凝聚剂、添加表面活性物质、添加反应剂、冷冻-解冻及添加助滤剂等。 凝聚——指在电解质作用下,由于胶粒之间双电层电排斥作用降低,电位下降,而使胶体体系不稳定的现象;
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