【北京101中学内部】植物细胞工程.ppt

第二节 植物细胞工程（植物的克隆） 2011年3月 周斌 细胞工程的概念 细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，通过细胞水平或细胞器水平上的操作，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品的一门综合科学技术。根据操作对象的不同，可以分为植物细胞工程和动物细胞工程。 一、植物组织培养技术 植物组织培养的概念：在无菌和人工控制的条件下，将离体的植物器官、组织、细胞（如叶、根、芽、茎、花瓣的一部分或花粉等），培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件（光照和温度），诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。 外植体：用来进行组织培养的植物离体细胞、组织或器官片段。 植物组织培养过程： （1）无菌 （2）离体 （3）含有适宜营养物质的培养基（矿质元素、蔗糖、维生素、有机添加物） （4）不同激素的诱导 （5）适宜的温度、光照、pH等。 植物组织培养时为什么要无菌操作？如何操作？ 外植体中含有丰富的营养物质，离体后失去了自我保护的机制，很容易被环境中的微生物感染而损坏或死亡。培养基利用高压蒸汽灭菌，外植体依次用清水、加洗衣粉的水、70%的酒精、0.1%的氯化汞消毒。接种工具和操作场所也要分别灭菌或消毒。 用于植物组织培养的MS培养基配方 NH4NO3 1650mg KNO3 1900mg KH2PO4 170mg MgSO4·7H2O 370mg CaCl2 440mg FeSO4·7H2O 27.8mg Na2EDTA 37.3mg MnSO4·4H2O 22.3mg ZnSO4·4H2O 8.6mg H3BO3 6.2mg 植物组织培养的实验操作步骤 制备MS培养基：一般先配制浓度较高的母液，利用母液配制培养基时，再根据各种母液的浓缩倍数计算用量。 外植体消毒 接种：将外植体按正确方向插入培养基中，每瓶接种6-8块。 培养：在恒温光照培养箱培养。 移栽：将瓶中幼苗移栽到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生长一段时间。 栽培：将长壮的幼苗移栽到自然土壤中生长。 二、植物细胞工程的实际应用 1、开辟了植物繁殖的新途径 微型繁殖 作物脱毒 制造人工种子 植物微型繁殖技术：用于快速繁殖优良品种的植物组织培养技术。也叫快速繁殖技术。 植物微型繁殖技术的优点： 保持优良品种遗传特性； 取材少、培养周期短，繁殖率高，便于自动化管理，因此能实现高效、快速、大量繁殖种苗。 作物脱毒 病毒的危害 由于大多数园艺作物采用无性繁殖法，病毒在营养体内传染，并逐代积累，危害相当严重。 茎尖培养脱毒?原理 病毒繁殖运输速率比茎尖分生组织细胞生长速率慢，这样就使茎尖区域部分细胞没有病毒。利用茎尖组织培养就可得到脱毒苗。 优势 脱毒苗效果好，后代遗传稳定，产量和品质明显提高。 人工种子：以植物组织培养得到的胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等材料，经过人工薄膜包装得到的种子。 人工种子与常规有性生殖产生的种子比较的优点： 生产周期短 植株生长整齐，不会出现性状分离 生产不受季节、气候和地域的限制 制种车间化，占地面积小。一间30平方米的培养室可以放置一万多个瓶子，足以同时繁殖十万多颗人工种子。 2、进行农作物新品种的培育 单倍体育种 突变体的利用 与转基因技术结合培育转基因植物 单倍体育种 原理：染色体数目(整倍)变异和细胞全能性 过程：甲品种×乙品种→F1→F1花药离体培养→若干单倍体小苗→秋水仙素处理→若干纯合植株(纯系品种)→人工选择→新品种 优点:极大缩短育种年限； 影响花药培养的因素 材料的选择 不同植物、同一植物花期的不同阶段、花粉的不同发育时期，花药培养成功率都不同。如月季，一般选择初花期，花完全未开放的花蕾采集花药培养。 培养基的组成 主要是培养基中一些微量元素和激素等物质的影响。 亲本植株的生长条件 材料的低温预处理 接种密度 花药离体培养的操作步骤 材料的选取 选择花药时，一般要通过镜检来确定其中的花药是否处于适宜的发育期。 材料的消毒 一般先用70%的酒精浸泡花蕾约30s，取出后立即用无菌水清洗；再用无菌吸水纸吸干表面水分，放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2-4min，取出后再用无菌水冲洗3-5次。 接种和培养 在无菌条件下除去萼片和花瓣，立即将花药剪下（与花丝相连部分的花药不要），每瓶接种7-10个花药。在25℃下黑暗培养20-30天，等花药开裂长出愈伤组织或胚状体后，将愈伤组织或胚状体及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。等长出幼小植株后再光照。 常规杂交育种 原理：基因重组 过程：甲品种×乙品种→F1→F1自交→F2→人工选择→F2自交→