生物工艺控制 .pptVIP

目前，已比较成功地采用补枓的方法来调节pH值，如氨基酸发酵采用流加尿素的方法，特别是次级代谢产物抗生素发酵，更常用此法。这种方法，既可以达到稳定pH值的目的，又可以不断补充营养物质，特别是能产生阻遏作用的物质。少量多次补加还可解除对产物合成的阻遏作用，提高产物产量。也就是说，采用补料的方法，可以同时实现补充营养、延长发酵周期、调节pH值和培养液的特性（如菌浓等）等几个目的。 最成功的例子就是青霉素的补枓工艺，利用控制葡萄糖的补加速率来控制pH值的变化范围（现已实现自动化），其青霉素产量比用恒定的加糖速率和加酸或碱来控制pH值的产量高25%。 * * 发酵培养基一般是选用含有快速和慢速利用的混合氮源。如氨基酸发酵用铵盐和麸皮水解液、玉米浆；链霉素发酵采用硫酸铵和黄豆饼粉。但也有使用单一的铵盐或有机氮源(如黄豆饼粉)。它们被利用的情况与快速和慢速利用的碳源情况相同。 为了调节菌体生长和防止菌体衰老自溶，生产中也要控制氮源的浓度，除了在基础培养基中控制氮源浓度外，在发酵过程中，补加氮源来控制浓度。 * （2） 磷酸盐浓度的影响和控制 磷是微生物生长繁殖所必需的成分，也是合成代谢产物所必需的。微生物生长良好所允许的磷酸盐浓度为0.32-300 mmol，但对次级代谢产物合成良好所允许的最高平均浓度仅为1.0 mmol，提高到10mmol，就明显影响其合成。 * 磷酸盐浓度在初级代谢中的要求不如次级代谢严格。 对抗生素来说，常常是采用生长亚适量（对菌体生长不是最适合但又不影响生长的量）磷酸盐浓度，其最适浓度取决于菌种特征、培养条件、培养基的组成和来源等因素。 * 6.2.2 灭菌情况 一般随灭菌温度的升高，时间的延长，对养分的破坏作用越大，从而影响产物的合成。 如葡萄糖氧化酶发酵培养基的灭菌条件对产酶的影响： 灭菌蒸汽压力/(lb/in2) 10 15 时间/min 15 25 15 25 葡萄糖氧化酶酶活/(U/mL) 48.08 43.72 35.04 27.10 * 6.2.3 种子质量 §接种菌龄 一般，接种菌龄以对数生长期的后期，即培养液中菌浓接近高峰时所需的时间较为适宜。 最适的接种菌龄要经多次试验，根据其最终发酵结果而定。 §接种量 接种量的大小是由发酵罐中菌的生长繁殖速度决定的。 * §菌体浓度 菌体浓度简称菌浓（cell concentration）是指单位体积培养液中菌体的含量。菌浓的大小与菌体生长速率有很大的关系，菌体生长速率与微生物的种类及遗传特性有关，不同种类的微生物的生长速率是不一样的，细胞越复杂，分裂所需的时间越长。 * 菌浓的大小对发酵产物有很重要的影响。 在适当的比生长速率的条件下，发酵产物的产率与与菌浓成正比关系，即菌浓越大，产物的产量越大。但在好氧发酵中，菌浓太大，影响氧的传递，故在发酵中应控制适当的菌浓。 * 6.2.4 温度对发酵的影响和及其控制 微生物的生长和产物的合成都是在各种酶催化下进行的，温度是保证酶活性的重要条件，因此在发酵系统中必须保证稳定而合适的温度环境。 * (1) 温度对微生物生长的影响 大多数微生物在20-40℃的温度范围内生长。嗜冷菌在温度低于20℃下生长速率最大，嗜中温菌在30-35℃左右生长，嗜热菌在50℃以上生长。 * (2) 温度对发酵过程的影响 温度对青霉菌生长速率、呼吸强度和青霉素生产速率的影响如上图所示。可以看出，温度对参与生长繁殖、呼吸和青霉素形成的各种酶的影响是不同的。 * 青霉菌： 生长 E=34 kJ/mol 呼吸 E=71 kJ/mol 产物合成 E=112 kJ/mol 青霉素形成速率对温度最为敏感，偏离最适温度引起的生产率下降比其他两个参数的变化更为严重。 活化能E反映温度变化对酶反应速率的影响 * (3) 温度对发酵液物理性质的影响 ＃影响氧在发酵液中的溶解度 温度 溶氧 ＃影响基质的分解速率 如菌体对硫酸盐吸收在25℃时最小 * (4) 温度对生物合成方向的影响 金色链丝菌 研究发现，温度与微生物的调节机制关系密切。例如，在20℃时，氨基酸末端产物对其合成途径的第一个酶的反馈抑制作用，比在其正常生长温度37℃时更大。因此，考虑在抗生素发酵的后期降低温度，加