实验一、培养基的配制.pptVIP

实验报告 一、目的要求 二、原理 三、器材 四、操作步骤 五、结果 一、实验目的 目的：学习和掌握配制培养基的一般方 法和步骤 二、操作步骤 1、牛肉膏蛋白胨培养基的配制 牛肉膏蛋白胨培养基的配制 配方： 牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂15-20g， 水1000ml，pH7.4-7.6。 牛肉膏蛋白胨培养基的配制 1.? 称量 按配方称取各种药品放入大烧杯。 牛肉膏用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水熔化后倒入烧杯,也可放在称量纸上, 称量后直接放入水中，这时若稍微加热,牛肉膏便会与称量纸分离，然后取出纸片。 蛋白胨很容易吸湿，在称取时动作要迅速。 牛肉膏蛋白胨培养基的配制 2??.? 熔化 在烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，加热熔化，最后补足所损失的水分。 注意：在琼脂熔化过程中，需不断搅拌，以防琼脂烧焦糊底。 配制培养基时，不可用铜或铁锅加热熔化，以免离子进入培养基中，影响细菌生长。 牛肉膏蛋白胨培养基的配制 3.??调pH 用滴管向培养基中逐滴加入 1mol/L NaOH 或1mol/L HCl ，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH，直至pH达到所需范围。 注意： pH不要调过头，以避免回调而影响培养基内各离子的浓度。 牛肉膏蛋白胨培养基的配制 4.分装 分装试管，其装量不超过管高的1/5;分装三角瓶的量以不超过三角瓶容积的一半为宜。 注意：分装过程中，注意不要使培养基沾在管（瓶）口上，以免沾污棉塞而引起污染。 牛肉膏蛋白胨培养基的配制 5.?? 加塞 培养基分装完毕后，在试管或三角瓶上塞上棉塞（或泡沫塑料塞及试管帽等），以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。 牛肉膏蛋白胨培养基的配制 6.??包扎 加塞后，再在棉塞外包一层牛皮纸或报纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道棉绳或橡皮筋扎好。用记号笔注明培养基名称、班级、组别、配制日期。 牛肉膏蛋白胨培养基的配制 7.??灭菌： 121℃灭菌20-30min。 8.搁置斜面： 将灭菌的试管培养基冷至50℃左右（以防斜面上冷凝水 太多），将试管口端搁在合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。 9.无菌检查 ： 放入37℃的温室中培养24-48h，以检查灭菌是否彻底。 2、高氏Ⅰ号培养基的配制 高氏Ⅰ号培养基的配制 配方： 可溶性淀粉20g，NaCl 0.5g，KNO3 1g， K2HPO4 ·3H2O 0.5g，MgSO4·7H2O 0.5g， FeSO4·7H2O 0.01g，琼脂15-20克， 水1000ml， pH 7.4-7.6 高氏Ⅰ号培养基的配制 1、称量和溶化 先称取可溶性淀粉，放入小烧杯中，并用少量冷水将淀粉调成糊状，再加入少于所需水量的沸水中，继续加热，使可溶性淀粉完全溶化，然后再称取其他各成分依次逐一溶化。待所有药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。 高氏Ⅰ号培养基的配制 2、pH的调节、分装、包扎、灭菌及无菌检查同牛肉膏蛋白胨培养基的配制。 121℃灭菌20-30min。 3、马丁氏培养基的配制 马丁氏培养基的配制 配方： KH2PO4 1g，MgSO4·7H2O 0.5g，蛋白胨 5g，葡萄糖 10g，琼脂 15-20g，水 1000ml，pH 自然 马丁氏培养基的配制 1、称量和溶化 准确称取各成分，并将各成分依次溶化在少于所需要的水量中。将各成分完全溶化后，补足水分到所需体积。再将孟加拉红配成1%的溶液，在1000ml培养基中加入1%的孟加拉红溶液3.3ml，混匀后，加入琼脂加热溶化。 马丁氏培养基的配制 2、分装、?加塞、包扎、灭菌检查与牛肉膏蛋白胨培养基相同。 115℃灭菌30min。 马丁氏培养基的配制 3、链霉素的加入 将链霉素配成1%的溶液，在100ml培养基中加1%链霉素液0.3ml，使每毫升培养基中含链霉素30μg。 注意：链霉素受热容易分解，所以临用前，将培养基熔化后待温度降至45-50℃时