- 1、本文档共24页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
- 6、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
酶联免疫吸附试验zy.ppt
酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assays, ELISA) ;免疫学三大标记技术; ELISA 的发展历程;酶联免疫吸附试验(ELISA);ELISA反应类型;1.将抗体包被在固相载体上。
2.如样品中含有抗原,则结合为抗原抗体复合物。
3.再加入以辣根过氧化物酶标记的已知抗体,使之与抗原结合,形成抗
体-抗原-酶标记抗体复合物。
4.标记的酶可催化底物(四甲基联苯胺)起显色反应,指示特异性抗原
抗体反应的存在。在一定范围内显色深浅与抗原量成正比
;双抗体夹心法;;桥联法(ABC-ELISA):;操作步骤
1、装板条(勿摸孔底、注意方向)
2、加抗原(勿刮孔底、勿打出太多气泡)
3、孵育 37℃ 30min(全班同步)
4、甩去孔内液体,
洗涤3次:洗涤液加满、略震晃、甩去、拍干 (注意团队合作)
5、加抗体,每孔100ul
6、孵育 37℃ 30min(全班同步)
7、重复第4步,但洗4次
8、加底物A和B各100ul,略震晃混匀
9、孵育 37℃ (全班同步)10min左右,待色变蓝
10、加终止液50ul,略震晃混匀
11、酶标仪测OD
12、画标准曲线,确定样本浓度;;操作注意事项;ELISA技术要点 ;ELISA技术要点;免疫吸附剂:
固相的抗原或抗体称为免疫吸附剂。将抗原或抗体固相化的过程称为包被(Coating)。
若包被的蛋白浓度过低,在包被后再用1%~5%牛血清白蛋白包被一次,以消除非特异性显色的干扰,这一过程称为封闭。;酶和底物:
酶:要求纯度高、催化反应的转化率高、专一性强、性质稳定、来源丰富、价格低廉。制备的酶标抗体或抗原性质稳定,保持活性和催化能力。
常用的酶:辣根过氧化物酶(HRP) 碱性磷酸(AP)
对应于HRP的底物:邻苯二胺(OPD)四甲基联苯胺(TMB)
对应于AP的底物一般采用对硝基苯磷酸酯(p-NPP)。产物为黄色的对硝基酚,用NaOH终止酶反应后,黄色可稳定一段时间
OPD:灵敏度高,比色方便。缺点是应用液稳定性差,具有致异变性。
TMB:经酶作用后由无色变蓝色,对比鲜明。加酸中止后变黄色,可用于定量。稳定性好,无致异变性。
;酶与抗原或抗体的结合
戊二醛交联法
过碘酸氧化法
;Add HRP labeled antibody;型号:ThermoLabsystems Multiskan MK3
将酶标仪后部的电??开关打开,仪器将显示自检、基础酶联、软件版本号,随后显示“基础酶联”、“准备!”和具体时间。开机显示主界面后,预热5分钟。
按“调出”键,再按“4”、“输入”键,选择程序4进行测量。(单波长450nm检测、每板第1列为空白)
将96孔酶标板置于酶标板架,(48孔酶标板用黑色配件遮住另外48孔)确认稳固。
按“开始”键,显示“正在读数”,打印机自行打印结果,每组根据数据在半对数坐标纸上画出标准曲线,并得到标本的含量。
再按“开始”键,对下一块酶标板进行数据检测。;半对数坐标纸;
ELISA的各种方法中,包被、酶标记和被检测的分别是什么?
ELISA实验过程应注意些什么?使结果可靠有可比性。;
您可能关注的文档
- 春暖花开花园建设的公告环评报告.pdf
- 身体各部位名称及功能课件.ppt
- 春江花房地变更环评环评报告.pdf
- 身体测量与血压测量课件.ppt
- 车站深基坑开挖方案最终汇报课件.ppt
- 春沐源岭南生态小镇农业观光一建设环境影响报告表公告环评报告.pdf
- 轮转年轻护士能力理论培训2课件.ppt
- 软件公司新员工培训模拟公司.ppt
- 春雨路道路恢复提升工程环评报告.pdf
- 昶园商住小区二点击次数昶园环评报告.pdf
- [深圳]2024年春季广东深圳市中医院招聘笔试历年高频考点(难、易错点)附带答案详解.docx
- [温州]浙江温州乐清市医疗保障局招聘编外人员5人笔试历年高频考点(难、易错点)附带答案详解.docx
- [淮南]安徽淮南经济技术开发区管委会招聘工作人员笔试历年高频考点(难、易错点)附带答案详解.docx
- [深圳]2024年广东深圳市福田区莲花街道办事处招聘场馆管理岗5人笔试历年高频考点(难、易错点)附带答案详解.docx
- [深圳]2024年广东深圳市检察机关招聘警务辅助人员22人笔试历年高频考点(难、易错点)附带答案详解.docx
- [清远]2024年广东清远清城区石角镇村(社区)聘干招聘19人笔试历年高频考点(难、易错点)附带答案详解.docx
- [温州]2024年浙江温州泰顺县公办幼儿园劳动合同制教职工招聘30人笔试历年高频考点(难、易错点)附带答案详解.docx
- 2024年04月安徽铜陵市铜官区公务用车平台招考聘用劳务派遣制工作人员笔试历年典型考题及考点研判与答案详解.docx
- 2024年04月山东日照莒县事业单位优秀青年人才招考聘用32人笔试历年典型考题及考点研判与答案详解.docx
- 2024年04月山东德州市德城区教育系统引进高层次教育人才100人笔试历年典型考题及考点研判与答案详解.docx
最近下载
- 环境保护、生态文明、绿色生活主题班会.pdf VIP
- 2020-2021学年度第二学期合肥市小学生发展绿色指标评价测试四年级语文试卷分析.docx VIP
- 2023年08月中国水产科学研究院淡水渔业研究中心公开招聘2人(第三批江山无锡)笔试历年高频考点试题含答案带详解.docx
- 机械原理课程设计-包装机推包机构运动方案设计.docx VIP
- 回归分析练习题(有答案).pdf VIP
- 人教PEP版小学三年级下册英语专题试卷和答案(7套).pdf
- 大连金石滩国家地质公园景区旅游.pptx VIP
- 魔兽世界宏命令完全教程.docx
- 2023年医疗结构化面试题库(含答案).pdf VIP
- 橡胶加工设备租赁合同.docx
文档评论(0)