bfgf诱导表皮细胞去分化的初步研究.doc

编号：200806043 刊用形式：论著 bFGF诱导表皮细胞去分化的初步研究 孙晓艳1，付小兵1,2，伊海英2，刘惠玲1，孙同柱2 （解放军总医院：1基础医学研究所，北京 100853； 2第一附属医院全军创伤修复重点实验室， 北京 100037） 摘 要：目的 初步探索表皮细胞体外去分化模型的建立方法，为表皮细胞去分化分子机制的研究及从去分化的方法来制造干细胞，实现创伤后无延迟、无瘢痕的完美修复提供实验参考。方法 HEKa细胞体外培养6~7代时开始出现老化迹象，细胞体积膨大，形态发生明显改变。加入浓度为100 ng/mL的碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）诱导液分别培养6、12、24、48、72 h后，MTT法检测bFGF对表皮细胞体外生长的促进作用。同时采用免疫细胞化学染色法、流式细胞检测技术、RT-PCR法检测bFGF诱导培养后，表皮细胞的表型及功能的改变。结果 MTT检测结果显示浓度为100 ng/mL、诱导时间为36~48 h为诱导表皮细胞去分化的最佳实验条件。bFGF的作用之下，老化的HEKa细胞周围开始出现新生的表皮干细胞样克隆。免疫细胞化学检测表明实验组细胞中β1 整合素、CK19、CK14的表达增强，而CK10作为终末分化细胞的标志，在bFGF诱导组中的表达明显降低。流式细胞检测分析显示bFGF作用后，实验组CK19表达阳性的细胞与对照组相比明显增多（分别为74.77%和15.74%）；CK14表达阳性的细胞也由原来的67.26%增加至被检测细胞总数的87.14%。而bFGF诱导作用后，被检测细胞中表达CK10阳性的细胞数量较对照组明显下降（分别为4.56%和98.56%）。此外，RT-PCR检测结果同样再次支持了表皮细胞去分化的理论。在bFGF诱导组中，β1整合素、CK19、CK14 的mRNA转录水平明显上调，而CK10的mRNA表达则明显下降。结论 bFGF能够在体外诱导表皮细胞逆转分化形成幼稚型表皮前体干细胞，但其涉及具体机制需要进一步深入研究。 关键词：表皮细胞；去分化；干细胞；免疫细胞化学；流式细胞检测；MTT；RT-PCR 中图法分类号：R644 文献标识码：A Dedifferentiation of Epidermal cells into Epidermal Progenitor Stem Cells Induced by bFGF SUN Xiao-yan1, FU Xiao-bing1, YI Hai-ying2, LIU Hui-ling1, SUN Tong-zhu2 (1Insititute of Basic Medical Science; 2Burns Institute, the First Affiliated Hospital, Chinese PLA General Hospital, Beijing 100037, China) Abstract: Objective To investigate the dedifferentiation of epidermal cells into their progenitor stem cells induced by basic fibroblasts growth factors (bFGF) in vitro. Methods HEKa cells obtained from Casacade were found flattening and formation of cell to-cell contacts, which resembled differentiated epidermal cells in vivo. To examine the effect of growth factors on the cell proliferative alterations, HEKa cell line was incubated with bFGF (100ng/ml) for different periods (6, 12, 24, 48, 72 hr), then the cell proliferation was measured by MTT assay. Moreover, the phenotypic changes and the cell-fate determination of HEKa cells 基金项目：国家重点基础研究发展计划(973计划)(2005CB522603) Supported by National Basi