现代生化技术实验讲义(生工10)19.doc

实验一 双缩脲法测定蛋白质含量 一、实验目的 二、实验原理 三、材料与试剂 四、操作30min后，用分光光度计于540nm测定各管吸光度，从标准曲线查出样品蛋白质含量。平行测定三次，计算平均值。 五、结果与讨论 六、思考题 法测定蛋白的原理是什么？ 实验二 旋光法测定味精的纯度 一、实验目的 二、实验原理 三、材料与试剂 四、操作五、结果与讨论 式中： C——谷氨酸的浓度，即100ml样品中，所含L－谷氨酸的克数。 a——测得的旋光度 L——旋光管的长度，dm [a]tD：测定温度为t℃时，L－谷氨酸的比旋光度，按 [a]tD＝32 ＋ 0.06 ×（20－t）进行计算。 2、味精纯度的计算 根据样品中L－谷氨酸的浓度，由下式计算样品中味精的纯度： 将相关实验结果和计算结果填入下表中： 温度 t（℃） 旋光管的长度 L（dm） [a]tD 旋光度a C （g/100ml） 味精纯度 （%） 注：味精纯度是指一水合L-谷氨酸一钠（分子量187.13）的含量。在盐酸介质中通过比旋光度测出的为L-谷氨酸（分子量147.13）的浓度，因此计算时需进行换算。 六、思考题 的原理是什么？ 一、实验目的 二、实验原理 剂β-巯基乙醇的生成1-硫代-2-烷基异吲哚三、材料与试剂 μg/ml硫酸奎宁溶液：用0.05mol/L硫酸配制； pH 9.5 硼酸缓冲溶液：准确称取硼酸2.4740 g 溶于水并稀释至100 ml，再用2 mol/LNaOH 溶液调pH 至9.5。 pH 8.04 磷酸缓冲溶液：准确称取磷酸二氢钾2.2675 g 于烧杯中，用少量去离子水溶解后，定量转入250 ml 容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀；同法称取磷酸氢二钠5.9690 g 用水溶解并定容至250 ml。取上述配好的磷酸二氢钾10.0 ml 与磷酸氢二钠190.0 ml 混合均匀，即得pH 8.04 的磷酸缓冲溶液。 0.1%邻苯二甲醛衍生化试剂：称取50mg邻苯二甲醛，加入1ml无水乙醇使其完全溶解，再加入19 mL pH9.5的硼酸缓冲溶液和200 μL β-巯基乙醇定容至50m。避光保存于4冰箱, 每隔一天补10 μβ-巯基乙醇。100.0 mg, 用去离子水溶解定容至50 ml，准确吸取0.0、1.0、2.0、3.0、4.0 ml 分别置于100 ml 容量瓶中，用去离子水定容至刻度，相当于每毫升含有0.0、20.0、40.0、60.0、80.0 μg 丙氨酸。此系列标准溶液应在临用时配制。 样品氨基酸溶液。 荧光光度计；微量注射器或移液枪。 四、操作μg/ml硫酸奎宁溶液对仪器定位，调节荧光强度为100。 分别移取2 ml 0.0、20.0、40.0、60.0、80.0 μg/ml的标准丙氨酸溶液于干燥试管中，分别加入2ml 0.1%邻苯二甲醛衍生化试剂和2 ml pH 8.04 磷酸缓冲溶液，立即混匀，暗处室温放置5min后，测定其相对荧光强度。以丙氨酸含量为横坐标，相对荧光强度为纵坐标，绘制标准曲线。 2、样品的荧光测定 取2 ml样品溶液，分别加入2ml 0.1%邻苯二甲醛衍生化试剂和2 ml pH 8.04 磷酸缓冲溶液，立即混匀，暗处室温放置5min后，测定其相对荧光强度。与标准曲线对照，确定样品中氨基酸的含量。 五、结果与讨论 六、思考题 ？  实验四 青霉素效价的生物测定 一、实验目的 二、实验原理 三、材料与试剂 3H2O0.253g)，K2HPO40.8g，蒸馏水100ml。 ②0.85%Nacl生理盐水溶液。 ③青霉素钠盐：1.667U/mg（1U即1国际单位，等于0.6ug）。 其他： 牛津小杯[不锈钢小管，内径（6+0.1）mm，外径（8+0.1）mm，高（10+0.1）mm]，培养皿（直径90mm，深20mm；大小一致，皿底平坦），试管、滴管、移液管（5、1ml）及大口10ml移液管等。 四、操作 2 3 0.4 1.0 1.4 9.6 9.0 8.6 0.4 1.0 1.4 3、标准青霉素和样品青霉素效价的测定 （1）倒底层培养基：取无菌培养皿6套，每皿移入9ml牛肉膏蛋白胨底层琼脂培养基，置水平待凝备用。 （2）铺含菌上层培养基：将装在三角瓶中的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（100ml）融化，待冷却到60℃左右时再加入60%葡萄糖液12ml和金黄色葡萄球菌菌液3～5ml，充分混匀后，用大口移液管吸取9ml于底层平板上迅速铺满上层，然后移置水平位置待凝备用。 （3）放牛津小杯：待上层充分凝固后，在每个琼脂板上轻轻放置4支牛津小杯（平板底部用记号笔作好标记），其间距应相等，如图所示： （图中A为1U/ml标准青霉素，B、C、D为其他剂量和样品青霉素溶液） （4）滴加标准样品液：用移液