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美国俄亥俄州立大学研发出一种“纳米RNA 颗粒”，为囊泡穿上“肿瘤探测外衣”，实现 高效特异的分子递送 原创2017-12-13 订阅号APExBIO 研究意义 利用天然的siRNA载体如细胞外囊泡将siRNA递送至受体细胞来实现特定基因的 沉默，一时引起了一片研究热潮，因为载体的利用避免了裸siRNA 被核酶（RNase） 降解使siRNA 被完整地送入靶细胞，很大程度上提高了治疗效果。然而，近几年 热度降低了很多，因为这种方法面临一个很大的阻碍，那就是天然细胞外囊泡的 靶向性并不好，导致分子的递送效率不高。近日，来自美国俄亥俄州立大学哥伦 布分校的研究团队利用RNA 纳米技术制成了一种RNA 纳米颗粒，这种颗粒形似箭 头，含有RNA 适体或叶酸（即特定的配体），控制箭头的方向可以使这些配体在 细胞外囊泡的外面表上展示，得到 “配体-展示细胞外囊泡”。细胞外囊泡外表 面的配体能够与受体细胞进行特异性结合，因而能够将囊泡内的siRNA 特异性并 高效地递送至靶细胞，导致靶基因的沉默。这种配体-展示细胞外囊泡可以有效 地阻断三种癌症模型中的肿瘤生长，包括前列腺癌、乳腺癌和结直肠癌。 RNA 纳米技术是一个新兴领域, 利用纳米技术制成的 RNA 纳米颗粒可载入沉默 基因的小干扰RNA，调控基因表达的micro-RNA，靶向癌细胞的核酸适体，或能 够催化化学反应的核酶，从而更直接更有效地靶向癌症转移灶。 噬菌体phi29 马达包装RNA （bacteriophage phi29 motor packaging RNA）的三 路连接（3WJ，three-way junction ）可以根据自身固有的性质折叠成螺旋区域之 间呈60°、120°、180°三个角度的平面结构（图1）。 图1 a，pRNA-3WJ 的原子力显微镜（AFM ）图像；b，3WJ 箭头或箭头的胆固醇标记位置示意图。 通过掺入RNA 适体（RNA aptamer，作为靶向配体），将pRNA-3WJ 延伸成箭 头状结构，以结合癌细胞中过度表达的特异性受体。工程化的pRNA-3WJ 用于修 饰从 HEK293T 细胞培养上清液中纯化的细胞外囊泡（extracellular vesicles ， EVs）。 细胞外囊泡是指从细胞膜上脱落或者由细胞分泌的双层膜结构的囊泡状小体，直 径从40nm 到1000nm 不等，包裹多种mRNA、microRNA 等小RNA、质粒DNA、 酶和神经递质等，参与细胞间通讯、细胞迁移、血管新生和免疫调节等过程。 一个单一的类固醇分子胆固醇三甘醇（TEG ）被结合到pRNA-3WJ 的箭头尾部以 促进3WJ 锚定在EVs 膜上。胆固醇通过其疏水部分自发地插入EVs 膜中。通过 简单地在37°C 下将胆固醇修饰的RNA 纳米颗粒与EVs 一起孵育 1 小时，实现 在纯化的EVs 表面上展示RNA 纳米颗粒。 EVs 作为治疗载体具有很大的潜力，因为它们在细胞之间的通信中起作用。它们 可以通过多种途径进入细胞，包括膜融合，四跨膜蛋白和整联蛋白受体介导的内 吞作用，脂质筏介导的内吞作用或微细胞增多。然而，受体细胞的特异性有限。 为了特异性靶向癌细胞，将三类靶向配体——叶酸（folate，FA）、前列腺特异 性膜抗原（PSMA）RNA 适体、表皮生长因子受体（EGFR）RNA 适体——连 接到3WJ 以展示在EVs 的外表面。叶酸是一种有吸引力的靶向配体，因为许多 上皮来源的癌症，如结直肠癌，过度表达叶酸受体。PSMA 在前列腺癌细胞中以 异常高水平表达，其表达也与更具侵袭性的疾病有关。之前有研究显示在EVs 上 展示的结合PSMA 并有2-氟（2F ）修饰的RNA 适体A9g 可以增强对前列腺癌 细胞的靶向效率。EGFR 在三阴性乳腺癌和转移性三阴性乳腺癌中高度过表达。 将EGFR 特异性2F-RNA 适体并入pRNA-3WJ 的一端，从而展示在EVs 上并增 强对乳腺癌细胞的靶向。 Survivin，一种细胞凋亡抑制因子，是肿瘤治疗中很有吸引力的一个靶点，因为它 的沉默可以降低致瘤性并抑制肿瘤转移。将survivin siRNA 装载在EVs 中（图2 ）， 可以评估体内前列腺癌，乳腺癌和结肠癌抑制的功效。为了提高siRNA 在体内的 稳定性，过客链（passenger strand）的嘧啶上进行了2F 修饰以提供RNA 酶抗 性，而引导链（guide strand ）未被修饰。 图