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助学园地 助考园地 章 末 整 合 分离微生物的方法 从混合样品中获得某种微生物的方法通常有两种： (1)利用该分离对象对某一营养物质有“嗜好”的原理，专门在培养基中加入该营养物质，从而使它成为一种加富培养基。 (2)利用该分离对象对某种抑菌物质的抗性，在混合培养物中加入该抑制物，经培养后，原来占优势的微生物生长受抑制，而分离对象却可乘机大大增殖，在数量上占优势。 培养基对微生物的选择作用分析 1. 选择培养基及应用实例 (1)选择培养基：在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进需要的微生物的生长，目的是从众多微生物中分离所需要的目的微生物。 (2)选择培养基应用实例： ①培养基中加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。 ②培养基中加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。 ③培养基中缺乏氮源时，可以分离固氮微生物，因为非固氮微生物不能在此培养基上生存。 ④当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。如石油是唯一碳源时，可以抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，达到分离能消除石油污染的微生物的目的。 2. ⑤改变微生物的培养条件，也可以达到分离微生物的目的，如将培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物。 植物组织培养 (1)原理：植物细胞的全能性。 (2)方式：愈伤组织培养(固体培养基、琼脂培养基)和细胞悬浮培养(液体培养基)。 (3)过程：脱分化和再分化。 植物组织培养和花药离体培养的比较 1. 植物组织培养技术和花药离体培养技术的异同 2. 植物组织 培养技术 花药离体 培养技术 相同点 理论依据 植物细胞的全能性 基本过程 影响因素 选材、营养、植物激素、pH、温度、光照等 不同点 选材 体细胞 生殖细胞 (花粉或卵细胞) 生殖方式 无性生殖 有性生殖 简析 微生物的纯培养技术 自然环境中微生物是混杂在一起的，因此分离获得纯培养物的基本原理：首先采用方法将单个的细胞与其他细胞分离开，进而提供细胞合适的营养和条件，使其生长成为可见的群体。 微生物的分散主要采用稀释的方法，而固体培养基能够使分散的细胞固着于一定的位置，与其他的细胞分离，从而生长成为一个单细胞来源的群体即纯培养物。 微生物的纯培养技术与无菌操作技术 1. (1)平板划线法：将合适的无菌培养基倒入无菌培养皿中，冷却后制备成平板。平板划线法中细胞的分离和稀释过程发生在接种环在固体平板表面上的划线和移动过程中，产生的单个细胞在培养基表面生长的后代就是纯培养物。 (2)涂布平板法：该法用在将细胞接种到培养基之前，通过液体稀释的方法分散细胞，最常用的液体稀释方法为10倍系列稀释，随着稀释程度的增大，单位体积中的微生物细胞数量减少，细胞得以分散。然后，将灭完菌冷却到45～50 ℃的培养基倒入无菌培养皿中冷却形成平板，然后选择细胞得以分散的合适稀释度的菌悬液加到平板中央，以玻璃刮铲将之均匀地涂布于整个平板上培养即可。 无菌操作技术 (1)对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。 (2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。 (3)为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 (4)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 2. 某化工厂的污水池中含有一种有害的难以降解的有机化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功筛选到能高效降解化合物A的细菌(目的菌)。实验的主要步骤(如图所示)。请分析回答下列问题。 【典例1】 (1)培养基中加入化合物A的目的是________，这种培养基属于________培养基。 (2)“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的________。实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是______________________________________________。 (3)在上述实验操作过程中，获得纯净“目的菌”的关键是 __________________________________________________。 (4)转为固体培养基时，常采用平板划线法进行接种，此过程中所用的接种工具是________，操作时采用________灭菌的方法。 (5)如何确认培养基是否合格？ __________________________________________________。 解析　欲筛选可降解有机物A的微生物，需配制只以有机物A为唯一碳源的选择培养基，以保障目的菌的生长，抑制非目的菌的生长繁殖；若需“震荡”培养，表明该目的菌为好氧型；平板划线接种的工具为接种环，使用前后均需灼烧灭菌。 答案　(1)筛选目的菌　选择　(2)化合物A　异养需氧型　(3)防止外来杂菌污染　(