用于主动靶向肿瘤治疗兼具酶响应和还原响应胶束的研究-材料工程专业论文.docx

西南交通大学硕士学位论文主要工作(贡献)声明本人在学位论文中所做的主要工作如下：1．首先制备了具有主动靶向基团苯硼酸(PBA)并有酶响应的聚合物PBA-PEG-Azo．PCL，同时选择喜树碱(CPT)作为抗癌药物，通过化学改性的方法合成了具有还原响应的前药mPEG．SS．CPT。利用核磁共振氢谱(1H NMR)以及凝胶渗透色谱(GPC)对材料结构进行了检测。接着通过溶剂挥发法制备了包载前药的胶柬，通过动态光散射仪(DLS)，透射电镜(TEM)对胶束粒径及形貌进行了表征。2．通过高效液相色谱(HPLC)对胶束的载药量、载药效率进行了检测，模拟人的生理环境进行了酶和还原响应性考察。然后对载药胶束的体外药物释放进行了检测。接下来对胶束进行了一系列的体外生物安全性评价以及细胞毒性和细胞吞噬等实验，得出了材料PBA．PEG．Azo．PCL具有很好的生物相容性，并且拥有靶向基团PBA且包载了前药的胶束可以更多的被人肝癌细胞(HepG2)所吞噬并抑制其增殖。3．在Kunming小鼠右腋下建立小鼠肝癌细胞(H22)肿瘤模型。考察了各种材料、载药胶束与裸药CPT对于21天内小鼠肿瘤体积和小鼠体重变化的情况。在第14天取出各组小鼠的心、肝、脾、肺、肾、肿瘤进行了组织学染色和免疫组化进一步分析了肿瘤的凋亡情况。同时利用小动物活体成像对于一定时间内药物在小鼠体内的分布进行了监测。最终可以得出，具有酶响应的载前药胶束在治疗时间内可以在肿瘤部位有最好的富集以及最长时间的滞留，小鼠体重没有明显波动，小鼠肿瘤体积变化最小，肿瘤细胞凋亡效果最明显。本人郑重声明：所呈交的学位论文，是在导师指导下独立进行研究工作所得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中作了明确说明。本人完全了解违反上述声明所引起的一切法律责任将由本人承担。学位论文作者签名：私导日期：纠6，易．7哗万方数据论文工作得到以下项目资助国家973计划(2012CB933600)子课题生长因子在微纳结构材料中的高活性固载及控释国家自然科学基金(51173 150)聚醚．聚酸酐胶束的形貌调控及其对肿瘤细胞生长影响的研究国家自然科学基金基于双重响应聚合物胶束的抗肿瘤主动靶向给药系统万方数据西南交通大学硕士研究生学位论文第1页摘要胶束高效递送药物靶向肿瘤细胞并在细胞内快速释放药物在癌症治疗中具有重大的意义。这是由于其具有提高药物传递效率、增加疏水药物的水溶性、延长血液循环时间和降低抗癌药物对正常组织的毒副作用等优点。但是怎样能使胶束更多、有效的富集并长时间滞留在肿瘤部位依然存在挑战。基于此我们合成了能够主动靶向肿瘤细胞且具有酶、还原双重敏感的载药胶束。为了克服药物喜树碱(CPT)水溶性差以及在血液循环中的不稳定性，将喜树碱通过一个还原响应链接与甲氧基聚乙二醇(mPEG)接枝形成前药(mPEG．SS．CPT)。疏水片段聚己内酯(PCL)和亲水片段聚乙二醇(PEG)利用偶氮苯(Azo)化学键连接形成双亲性的酶响应聚合物(PBA．PEG．Azo．PCL)，同时通过在PEG末端接枝苯硼酸(PBA)赋予胶束主动靶向能力。利用溶剂挥发法将前药包载进入聚合物胶束(PBA．PEG．Azo．PCL／mPEG．SS—CPT)，制备出具有主动靶向的酶和还原敏感性胶束。随后通过1H NMR、GPC、DLS及TEM等检测方法对材料及胶束的相关性质进行了检测。随后我们模拟人体生理环境下对载药胶束进行了体外药物释放实验。主要考察了载药胶束在兼具偶氮还原酶，辅酶还原型烟酰胺嘌呤二核苷酸磷酸(冬iADPH)和谷胱甘肽(GSH)作用下，48h内的药物累积释放量。接着进行了一系列的体外生物学评价，发现这种酶响应胶束具有良好的生物相容性，而载药胶束可以被HepG2肝癌细胞所吞噬并在细胞质内高浓度GSH作用下释放CPT抑制肝癌细胞增殖。最后，利用体内体外荧光技术展现出这种胶束具有良好的靶向肝癌细胞能力。通过Kunming小鼠接种H22肿瘤证明PBA—PEG．Azo．PCL／mPEG．SS．CPT具有对肿瘤治疗有着显著的疗效。关键词：酶响应；还原响应；纳米载体；主动靶向；癌症治疗万方数据西南交通大学硕士研究生学位论文第1I页AbstractHighlyeffectivedeliveryoftherapeuticagentswithmicellesintotargetcellsandsubsequentlyrapidintracelIularreleaseareofgreatimportanceincancertreatment．Thisisduetothefactthat themicellescanincreasethed