福建省2018年优质录像课评比安溪一中参评人教版选修三1.2《基因工程的基本操作程序》课件共28张PPT.ppt

1.2 基因工程的基本操作程序 * 非编码区 非编码区 编码区 RNA聚合酶结合位点 外显子 内含子 终止子 启动子 原核 真核 补充知识: 基因的结构 * 原核细胞 真核细胞 不同点 编码区是 _____的 编码区是间隔的、_____的 相同点 都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的 原核细胞与真核细胞的基因结构比较 思考 编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？ 连续 不连续 编码区 非编码 * 基因工程的基本操作程序 目的基因的获取 基因表达载体的构建 * 1、 目的基因主要是指___________________ 编码蛋白质的基因 一、目的基因的获取 * 2、 目的基因的来源 　目前被广泛提取使用的目的基因有：苏云金杆菌抗虫基因、植物抗病基因（抗病毒、抗细菌)、人胰岛素基因等。也可以是一些具有调控作用的因子 从已有的物种中分离 人工的方法合成 (1)从基因文库中获取目的基因 ①基因文库的概念及种类 ②从基因文库中得到目的基因的方法 （2）利用PCR技术扩增目的基因 （3）人工合成 未知序列 基因较小已知序列 已知序列 * 3、目前获取目的基因的常用方法： 用限制酶切成许多片断 ①构建基因文库 将含有某种生物不同基因 的许多DNA片断，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 * 基因组文库: 基因文库中包含了一种生物所有的基因,这种基因文库叫做基因组文库. 部分基因文库: 基因文库中包含了一种生物的一部分基因,这种基因文库叫做部分基因文库.(如cDNA文库) 种类 关系 供体细胞中的DNA 许多DNA片段 重组DNA 多种限制酶 分别与运载体连接 受体菌群细胞 分别 导入 * （供体生物的基因组文库） 基因组文库构建(鸟枪法) mRNA 反转录 cDNA (互补DNA） DNA聚合酶 双链DNA 反转录法： 部分基因文库（如cDNA文库）的构建 * 限制酶处理 分别与运载体连接 重组DNA 分别 导入 受体菌群细胞 （cDNA文库） 如果用某种生物发育的某个时期的mRNA 反转录产生的多种互补DNA（也叫cDNA）片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，那么，这个受体菌群体就构成了这种生物的cDNA文库。这种方法称反转录法 文库类型 cDNA文库 基因组文库 文库大小 小 大 基因种类 某种生物的部分基因 某种生物的全部基因 基因中启动子 无 有 基因中内含子 无 有 说明 基因文库的组建过程就包含基因工程的基本操作步骤。从基因文库中获取目的基因的优点是操作简便，缺点是工作量大，具有一定的盲目性. 基因文库的构建方法 * 寻根问底—— 为什么要构建基因文库？直接从含有目的基因的生物体内提取不行吗？ 提示：构建基因文库是获取目的基因的方法之一，并不是惟一的方式。如果所需要的目的基因序列已知，就可以通过PCR方式从含有该基因的生物的DNA中，直接获得，也可以通过反转录，用PCR方式从mRNA中获得，不一定要构建基因文库。但如果所需要的目的基因的序列完全不知，或只知道目的基因序列的一段，或想从一种生物体内获得许多基因，或者想知道这种生物与另一种生物之间有多少基因不同，或者想知道一种生物在个体发育的不同阶段表达的基因有什么不同，或者想得到一种生物的全基因组序列，往往就需要构建基因文库。 * 依据：目的基因的有关信息。 如：根据 基因的核苷酸序列 基因的功能、基因在染色体上的位置 基因的转录产物mRNA 基因的表达产物蛋白质等特性。 ②如何从基因文库中得到所需要的基因？ * 质粒 DNA分子 限制酶处理 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 重组DNA分子（重组质粒） —— 核心 同一种 二、基因表达载体的构建 1、过程: * 寻根问底：将目的基因直接导入受体细胞不是更简便吗？如果这么做，结果会怎样？ 提示：有人采用总DNA注射法进行遗传转化，即将一个生物中的总DNA提取出来，通过注射或花粉管通道法导入受体植物，没有进行表达载体的构建，这种方法针对性差，完全靠运气，也无法确定什么基因导入了受体植物。此法目前争议颇多，严格来讲不算基因工程。另外，目的基因不是完整的DNA分子，不进行表达载体的构建，也不可能在受体细胞内进行复制与表达。 * 2、目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 思考与探究：作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？为什么？ 不可以。因为目的基因在表达载体中得到表达并发挥作用，还需要有其他控制元件，如启动子、终止子和标记基因等。 * 科学家在培育