基因原核表达.pptVIP

基因的原核表达 原核表达质粒： pET-3—45,具有T7 promoter, lac operator, His-Tag(6 xHis), kam+ , IPTG诱导 pET-28a,b,c (Novagen, Invitrogen) pBAD系列，具有araBAD promoter for tightly regulated expression in E.coli, His-Tag(6 xHis), Amp+,L-ARABINOSE诱导 * pGEX系列： pGEX-4T－1，2，3 具有T7 promoter ,lac operator， Amp+，N-端GST ，Thrombin or Factor Xa蛋白酶切位点，能表达毒性蛋白, IPTG诱导 * 寄主菌： BL21(DE3) ,BL21(DE3)pLysS, BL21-CodonPlus(DE3)-RiLp contains extra copies of the tRNA genes that are rare in E.coli but more frequently in other organisms TOP101 * 原核表达的步骤 挑单菌落接种5 含抗生素的LB 液体培养基中，370C 过夜，约10－13小时 1：100—150倍转接新鲜的抗生素的LB 液体培养基 约3小时，OD600 为