应用光遗传学技术精确激活大鼠中脑导水管周灰质背侧区诱发防御行为的研究-生物医学工程专业论文.docx

Author’Ssignature：Supervisor’Ssignature：ExtemalReviewers：ExaminingCommitteeChairperson：MeiTian ExaminingCommitteeMembers：Qi望gi坠娶Li堕]凸2坠g)区!坠gXi垒Q茎i垒望g圣h曼塾gDateoforaldefence：4万方数据浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得浙江大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：／司，嗣礤，签字目期：豳仃年雩月够一日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解逝姿盘堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权堂姿盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：侧。丑娟、f导师签名：签字日期：反。百年；月旷日签字日期：0。／j一年万方数据致谢衷心感谢导师郑筱祥教授对我多年的悉心教导。郑老师严谨的治学、渊博的学识、深远的思维、广阔的视野，不仅在科研方面给予了我极大的鼓励和指导，在为人处世方面也给予了我诸多教诲，让我受益匪浅。每一次课题讨论、实验进展都倾注了郑老师的心血，提高了学生的科研素质与创新精神。这些年从郑老师身上领悟到很多为人、为学的哲理，鞭策我在未来的学习、工作、生活中更加勤奋刻苦。感谢段树民院士及虞燕琴老师、娄绘芳老师在大鼠脑区立体定位、病毒微注射、大鼠光纤埋植手术等诸多方面予以的无私帮助，在段组两年的学习生活让我学到了很多专业知识，拓展了我的思维和视野。感谢段组的刘怿君、周瑞、田均、奚望、杨鸿斌、杨俊华、张婷、段夺、陈常艳、覃丽明、郭智斐、韩勇、张斌等同学，他们在动物实验中给予了我耐心的指导和宝贵的建议。感谢深圳中国科学院先进技术研究院的王立平博士及其团队的罗振、刘晓雷、潘建清博士在病毒包装、纯化、浓缩等方面予以的帮助和指导。感谢严伟民、夏顺仁、孙永红、张恒义、宁钢民、叶学松、王平、李蓉、许卫、黄琪等老师，他们对我学习、研究工作给予了热情帮助。感谢实验室共同工作的师兄弟姐妹们，他们是：许科帝、刘珂舟、邓同乐、王明来、郎迪、许迎科、孙意国、顾玲、严明、卢娜、刘晓瑜、杨恰、张云、冯琳清、赵燕娜、王永平、索海瑞、吴坚、郭颂超、周宏、俞超楠、曲易、张佳呈、曹艳、李悦、汪芳、楼欣欣、高理强、韩业超等等，与他们一起生活和工作是我这些年最美好的回忆。感谢我的父亲、母亲及家人一如既往的支持、关心、鼓励和无私奉献，使我能冷静面对挫折并克服诸多困难，最终完成学业。感谢这些年陪伴在我身边的朋友们：王迪、郝欣、刘海丽Remi夫妇、刘璐、唐嵩潇、吴颖、宋燕、茅雏嘉、胡淑丽、曹阳、王利、张寅生、王彬、李宏宝、路静、秦海燕夫妇等，是你们丰富了我的生活，让我感到生活是的如此真实、如此快乐。陈思聪2014年6月于求是园万方数据浙江大学博士学位论文摘要摘要中脑导水管周灰质(PAG)被认为是调节恐惧、焦虑等负面情绪和防御性行为的最终神经通路。其中，中脑导水管周灰质背侧区(dPAG)主要负责主动性的防御行为。然而，电刺激与化学刺激作为传统的脑刺激方式，无法做到同时在时间和空间上达到精确可控，这给dPAG相关的神经功能研究及动物行为的精确控制带来了不利影响。近年求，光遗传学展示了其在激活或者抑制可兴奋细胞方面惊人的前景：当被适当波长的光照射时，光敏感离子通道打开，造成细胞膜的去极化，产生动作电位。这种基于光遗传学的技术同时拥有优异的时间和空间可控性，并且最大程度的规避了非特异性的激活或抑制。因此，选择性的使目标区域的神经元表达光敏感蛋白，即可达到对特定区域神经元特异性的控制，这为精确研究大鼠dPAG功能及在人为诱发大鼠产生防御性行为方面提供了新的方法。本研究拟利用光遗传学技术，精确激活大鼠dPAG核团，进而考察①有效光刺激强度是否与非条件反射的防御行为强度相关：②光刺激与电刺激诱发大鼠防御性行为的差异及产生差异的原因；③光刺激与电刺激激活中脑的范围；④dPA6内谷氨酸能神经元在防御性行为中的作用。本研究内容及创新点主要为：①建立了稳定的病毒包装、浓缩、纯化体系，成功的包装了AAV、LV，并进行了纯化浓缩，得到高滴度的一次感染性病毒颗粒(高达～109颗粒／ml的LV、～10B颗粒／ml的AAV)用于感染大鼠dPAG神经元。②建立了完整的光刺激系统用于稳定诱发大鼠僵直行为和逃跑行为