官方说明书大鼠抗心肌抗体(AMA)酶联免疫分析试剂盒 使用说明书.pdf

rat Anti-myocardial antibody (AMA) elisa immunoassay kit Manual /file/2054912 From ManualL ManualL collects and classifies the global product instrunction manuals to help users access anytime and anywhere, helping users make better use of products. Home: / Chinese: / This Manual: /file/2054912 大鼠抗心肌抗体（AMA）酶联免疫分析试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用 预期应用 ELISA 法定量测定大鼠血清、血浆、细胞培养物上清或其它相关液体中AMA 含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中AMA 水平。用纯化的抗体包被微孔 板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入AMA 抗原、生物素化的抗大鼠AMA 抗 体、HRP 标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB 在过氧化物酶的催化下 转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的AMA 呈正相关。 用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。 试剂盒组成及试剂配制 1.酶联板：一块（96 孔） 2.标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至 1ml，盖好后静置10 分钟以上， 然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为10000 pg/mL，做系列倍比稀释后，分别稀释成10000 pg/mL，5000 pg/mL ，2500 pg/mL，1250 pg/mL，625 pg/mL，312.5pg/mL，156 pg/mL，其 原液直接作为最高标准浓度，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/mL，临用前15 分钟内配 制。 如配制5000 pg/mL 标准品：取0.5ml 10000 pg/mL 的上述标准品加入含有0.5ml 样品稀释液 的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。 3.样品稀释液：1×20ml/瓶。 4.检测稀释液A：1×10ml/瓶。 5.检测稀释液B：1×10ml/瓶。 6.检测溶液A：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液A1：100 稀释，稀释前根据预先 计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如1ul 检测溶液A加99ul 检测稀释液A 的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。 7.检测溶液B：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液B1：100 稀释。稀释方法同检测 溶液A。 8.底物溶液：1×10ml/瓶。 9.浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 10. 终止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。 标本的采集及保存 1．细胞培养物上清：请离心后收集上清，并将标本保存于-20℃，且应避免反复冻融。 2．血清：标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 xg 离心20 分钟，取上清即可检测， 或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。 3．血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30 分钟内于2 -8° C1000 x g离心15