胚胎嵌合技术.ppt

胚 胎 嵌 合 技 术 王 子 玉 南京农业大学 动物胚胎工程技术中心 一、研究概况 嵌合体 (chimera)一词源于古希腊神话，其意是指狮头、羊身、龙尾等部分拼凑起来的怪兽。 中国的“龙”：九似 图腾 “龙角似鹿、头似驼、眼似鬼、项似蛇、腹似蜃、鳞似鲤、爪似鹰、掌似虎、耳似牛” 嵌合在生物学上是指同一个体中，基因型相异的细胞或组织混合存在的状态。 现代的胚胎工程技术中，也有一种叫胚胎嵌合的技术。它是将２个胚胎细胞（同种或异种动物胚胎）合并，共同发育成１个胚胎，即“嵌合胚胎”，然后将这个胚胎移植给受体，让其妊娠产仔。如果产下来的幼仔具有以上２种动物胚胎的细胞，则称其为“嵌合体动物”。 例如，用同一种类的黑鼠和白鼠胚胎嵌合，可生下黑白相间的花小鼠；不同种类的绵羊和山羊胚胎细胞嵌合，可生下绵山羊，它既有绵羊的特征，又有山羊的特征。 美国科学家将人类的干细胞加入到了许多动物的胚胎中，制造长着人的器官的嵌合体动物，例如猪体内流着人的血液的“人猪”，羊体内的肝脏80%的成分属于人类的肝脏的“人羊”，老鼠头颅里加入人的脑细胞的“人鼠”等。 “当人的器官在动物的体内生长，拥有人类细胞的猪或老鼠，是不是会像人类一样思考，却和动物一样行事？” “它们所带给人类社会的恐惧，早已超越了人类认知的界限和人类对科学成果的接纳空间”。 “嵌合体”是在生物界非常普遍的自然现象。 孪生子在同一个子宫中发育时会发生细胞交流，大多数孪生子体内都携带着某些来自其同胞的细胞，他们都是嵌合体。 在胎儿发育过程中，母体和胎儿也会发生细胞交流（从孕妇血液中可检测到胎儿的细胞），多数母亲体内终生携带着她们生下的子女的某些细胞，许多人体内也携带着他们的母亲的某些细胞，这些母亲、子女也都是嵌合体。 那些接受器官移植的人，更全都是嵌合体。 不同的物种也可以形成嵌合体。 例如把两个来自异种动物的胚胎嵌合成一个胚胎，就可以培育出异种嵌合体动物，像绵羊-山羊嵌合体、马-斑马嵌合体等都已培育成功。 许多心脏病患者移植了猪或牛的瓣膜，也是异种嵌合体。 重组DNA技术、转基因技术事实上也都是在制造分子层次上的嵌合体。 用日本黑牛精子与荷斯坦母牛卵母细胞受精和利木赞牛精子与日本红牛卵母细胞受精，通过体外胚胎聚合的方法，获得2头四品种嵌合体牛 铃木达行1998 天然嵌合体？ 二、嵌合体动物定义 嵌合体动物是指由两种或两种以上具有不同遗传性的细胞系组成的聚合胚发育成的个体。 在卵裂期甚至受精卵期所形成的嵌合体为原发性嵌合体(成体中每个器官都有两种类型的细胞）。 胚胎发育的晚期，通过组织移植或嫁接等方法所形成的部分组织或器官的嵌合称为次生性嵌合。 三、生产方法 1 囊胚显微注射法： 用显微操作技术将供胚的全部内细胞团注入除去部分内细胞团的受胚囊胚腔中，或将供胚的部分内细胞团注入受胚的囊胚腔中，也可以向受胚囊胚腔中（或卵周间隙）注入16细胞至桑甚胚的卵裂球、胚胎干细胞或已分化的细胞，使其发育为嵌合胚胎的方法即为囊胚注入法。 囊胚腔注射法嵌合体获得率最高 2. 聚合法 是指将去除透明带的两枚8细胞至桑葚期胚胎，或来自两个不同胚胎的卵裂球，或卵裂球与胚胎聚合在一起的方法。 酶消化法去除透明带 0.2-0.5％链霉蛋白酶在25-27℃下处理3min，移入含BSA（牛血清白蛋白）的培养液中终止酶的消化作用，用培养液洗净卵子（三次）。 裸胚聚合：移入胚胎联结液小滴（植物凝集素A，PHA，起粘合作用）中，培养10~20min，将融合胚轻轻移入20% PBS中洗涤两次，继续培养5h~10h后，移植入同期发情的受体输卵管或子宫角中。 卵裂球聚合：取相同数量的两个不同种属的卵裂球装入空的透明带内，加入PHA使其聚合，用琼脂包埋后体外直接培养或移入兔输卵管中使其发育至囊胚，最后再移入受体子宫角内。 卵裂球与胚胎聚合：将解离好的卵裂球慢慢释放于另一个裸胚的正上方，使二者直接接触，借助于PHA的作用使之聚合。 四、应用前景 胚胎嵌合是哺乳动物胚胎工程的重要组成部分，作为一种特殊的研究手段，在发育生物学、细胞生物学、胚胎学、病理学、免疫学、医学以及动物生产等领域都有着重要的作用。 1.在发育及细胞生物学方面的运用 (1)研究胚胎分化规律 胚胎嵌合技术是研究分析哺乳动物发生机制的重要手段之一。将基因型不同的胚胎细胞嵌合在一起，根据其在嵌合体组织或器官中的分布及存活率情况，研究胚胎早期分化的规律。 同时，通过嵌合胚胎内细胞团以外的细胞，可以研究各类胚细胞核的全能性及其正常分化能力。 (2)研究性分化机理 利用嵌合体可以研究性别分化以及参与性分化的细胞及其规律。 (3)孤雌生殖 利用嵌合体技术，己获得了孤雌生殖小鼠。胎盘发育不全。 铃木达行等（1998）通过聚合从日本红牛获取的卵母细