紫外-课件分光光度法的拓展.ppt

教员：提高学员学习兴趣，提升教学质量 发现适合“第二课堂”的苗子 实验教学新模式的改革与探索 学员：见识“验证性”实验以外的实验模式 锻炼初步的科研思维 锻炼综合能力与动手能力 褶合光谱法定量分析功能 (一)单组分定量分析 (二)双组分定量分析 (三)多组分定量分析 Ⅱ定量分析 苯酚-间苯二酚双组分体系的褶合光谱图-1 苯酚(1)，间苯二酚(2)，混合物(3) 在苯酚的过零点(271.90nm)计算间苯二酚含量 3 1 2 Ⅱ定量分析 3 1 2 苯酚-间苯二酚双组分体系的褶合光谱图-2 苯酚(1)，间苯二酚(2)，混合物(3) 在间苯二酚的过零点(280.64nm)计算苯酚含量 Ⅱ定量分析 其它化学计量学方法 多元线性回归法（MLR） Kalman滤波法 偏最小二乘法（PLS） 主成分回归法（PCR） …… Ⅱ定量分析 紫外-可见分光光度法 Ⅲ 在药学各学科中的应用 (一)无机化学 (二)有机化学/药物化学 (三)天然药物化学/生药学 (四)药理学/生化药学 (五)药剂学 Ⅲ药学应用 (一)无机化学 1、（混合）金属离子 Na+/Mg2+、Ag+/Cu2+、Fe2+/Fe3+、 Cr3+/Cr6+、Ca2+、Hg2+ etc. 2、其它无机离子 HCl/HAc、KIO3/I2、NO2- etc. Ⅲ药学应用 Ⅲ药学应用 常用显色剂： 偶氮胂类、偶氮氯膦类、卟啉类、铬天青S、罗丹明B、四苯基硼酸萘胺、偶氮吡啶间苯二酚、四环素、苯甲酰茚满、氧氟沙星、8-羟基喹啉、二甲酚橙等 图 KMnO4试剂空白(1)与NaNO2作用(2)的Vis光谱 525nm Ⅲ药学应用 (二)有机化学/药物化学 1、结构解析 2、中间体/产物的纯度检查 3、中间体/产物的稳定性试验 4、其它 反应是否发生及机理研究 etc. Ⅲ药学应用 图 偶氮染料Azo7在碱性DMF溶液中光照前后的UV/Vis光谱 图 聚苯胺(PANI)掺杂樟脑磺酸(CSA)前后的UV/Vis光谱 Ⅲ药学应用 图 卟啉化合物TAPP与cfDNA作用后的Vis光谱(Soret带) 图 白蛋白与苯甲酸钠(0.0-0.50mmol/L)作用后的UV光谱 Ⅲ药学应用 (三)天然药物化学/生药学 1、总生物碱、总黄酮、总皂苷 等的定量分析 2、药材鉴别 紫外光谱/紫外谱线组法 3、其它 Ⅲ药学应用 图 枳芩合剂(1)、黄芩苷对照品(2)和阴性对照液(3)的UV光谱 278nm △A 242nm Ⅲ药学应用 图 复方银黄口服液阳性(a)与空白(b)的UV光谱 图 马钱子粉中士的宁(a)与空白(b)的UV光谱 Ⅲ药学应用 酸性染料比色法：在一定pH介质中，生物碱类(B)与氢离子(H+)成阳离子(BH+)，一些酸性染料（如溴麝香草酚蓝、溴甲酚绿、溴酚蓝、甲基橙等）在此条件下可解离成阴离子(In-)，与上述阳离子(BH+)定量地结合成有色的络合物(BH+In-)，从而被某些有机溶剂定量地提取，选择一定的波长测定吸收度值，即得生物碱含量。 Ⅲ药学应用 半夏、山药的乙醇提取液的UV光谱图(1.半夏 2.水半夏 3.掌叶半夏 4.天南星 5.山药 6.腾冲山药 7.木薯根) 红曲的甲醇提取液UV/Vis光谱图(1.橙色红曲 2.变红红曲 3.发白红曲 4.巴克红曲 5.红色红曲 6.紫红红曲 7.烟色红曲 8.土曲霉) 紫外光谱法 Ⅲ药学应用 怀牛膝和红牛膝的4溶剂浸液紫外谱线组图谱峰位值比较 紫花地榆和白花地榆的4溶剂浸液紫外谱线组图谱峰位值比较 紫外谱线组法 Ⅲ药学应用 (四)药理学/生化药学 1、酶活力（效价）测定 木瓜蛋白酶、谷胱甘肽过氧化 物酶、脂肪酶、碱性磷酸酶、 对氧磷酶、酯酶 etc. 2、其它 DNA纯度检查、生物体液药物 含量 etc. Ⅲ药学应用 酶活力是酶催化生化反应能力的表征，一般以在规定条件下，每ml酶溶液，每分钟促进或抑制某生化反应达某程度(如50%)时的酶量定义为1个酶活力单位。 酶活力 = K ● △A 其中，K为常数，△A为酶（或底物、产物）作用前后的吸收度差值。 Ⅲ药学应用 图 MMO还原酶随NADH(底物)加入量增加(1→4)的UV/Vis光谱变化 460nm Ⅲ药学应用 图 过氧化物酶氧化邻苯二胺(底物)的UV/Vis光谱变化(扫描间隔0.3min) 220