单克隆抗体和抗体工程讲义.ppt

复习; ;抗原抗体反应;抗体的产生;第五章 抗体制药;第一节 概述;一、抗体;1975年： 首次用B淋巴细胞杂交技术制备出单克隆抗体，其具有高度特异性、均一性，以及来源稳定可大量生产等特点。 1984年：人-鼠嵌合抗体 1984年至今： 单克隆抗体的鼠源性及分子过大的问题得以解决，可仅作为与抗原特异性结合试剂。;二、抗体制药的现状;至06年底，全世界共有21个治疗用抗体药物批准上市，其中美国18个(包括9个被欧盟批准的），中国2个，日本1个。 2004年，约占全球药物市场份额的2％ 2006年，单抗药物的联合销售额为200亿美元。 2006-2012年间的年销售额增长率将为14%。而同一时期，小分子药物增长率预计仅为0.6%。单克隆抗体药成为增长最快的药物;现在有5大单抗药物占据了80%的市场份额，其中Roche和Geneteck联合开发上市的单抗药物：Avastin、Herceptin和Rituxan；另外还有雅培公司的Humira和强生公司的Remicade。 抗体药物的价格昂贵，治疗乳腺癌的Herceptin，250mg／支(15000元／支，一个疗程8支)，治疗淋巴瘤的Rituxan，400mg／支(21000元／支，一个疗程４支)。; 全世界正在研制的生物技术药品，25%为各类单克隆抗体。抗体市场快速增长的主要推动：一、销售持续攀升；二、新品种不断上市；三、研发方面的重金投入。 大型医药公司还会通过收购来获得对抗体新药的控制权。如最近美国强生公司收购了抗体药物研发的领头羊Centocor公司。;三、抗体制药－国内市场;3.罗氏产品占绝对优势 上海罗氏制药操控着整个国内抗体药物市场。巴利昔单抗是北京诺华的独家产品 鼠抗人CD3单抗是唯一国产品种，国内企业生产的该产品在整个抗体药物市场所占的份额不足1％。 抗CD3单抗企业份额：武汉生物制品所54.6％、北京费森尤斯医药公司44.9％、武汉生化制药厂0.5％。;SFDA到目前为止共批准了11个抗体药物上市，5个是进口产品，6个是在我国研发的，其中4个是国家生物制品I类新药，均为抗癌药物。此外，还有一些仿制产品处于3期临床阶段。已批准的诊断性单抗有31个 国内形成了三个抗体药物的中试及产业化基地。北京基地以百泰生物药业为主；上海基地以上海中信国健药业为主；西安基地由第四军医大学???成都华神集团合作形成。 ;泰欣生(尼妥珠单抗,Nimotuzumab，百泰药业)：重组人源化抗人表皮因子受体(EGFR)单克隆抗体注射液，2008年6月上市，人源化程度95%，是世界上第三个用于治疗实体瘤的单克隆抗体。 目前定价:50mg/10ml（3680元） 泰欣生上市不仅代表我国在单抗药物人源化技术领域取得了重大突破,更重要的意义在于突破了哺乳动物细胞规模化培养这一生物技术瓶颈 ;碘［131I］美妥昔单抗注射液（西安基地） ［131I］人鼠嵌合型肿瘤细胞核单抗注射液（上海基地） 注射用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白”（商品名为“益赛普”）（上海基地）;四、单克隆抗体的应用;治疗用抗体发展的三个阶段; 基因工程抗体生成技术;抗体（antibody）： 由B细胞产生的免疫蛋白，它能识别抗原的某一特定位点。抗体分子由两个完全相同的重链分子以及两个完全相同的轻链组成。 B细胞（B cell）： 由骨髓细胞分化而来的能产生抗体的淋巴细胞。 单克隆抗体: 是将抗体产生细胞与骨髓瘤细胞融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而生产的。;内容结构;一、抗体的结构与功能;;Ig G 结构;用木瓜蛋白酶处理，将抗体分解成3个部分 (2个Fab片段和1个 Fc片段)； 　 Fab：一条完整的轻链和重链的可变区，轻链和重链恒定区。CL和CH1之间以二硫键连接； 保存有抗原结合活性和特异性。保留VH和VL即可完全获得原抗体的抗原结合活性，Fv Fc：两条重链的CH2和CH3区域，二硫键连接，没有抗原接合活性，但是抗体结合上抗原后激活免疫反应的主要部位。;接受抗原刺激后，能分泌针对该抗原的特异性抗体，在体液免疫中具有重要功能。 B淋巴细胞本身是一种终末分化细胞，通常不再进行细胞分裂，存活一段时间后便会死亡——短命细胞;骨髓瘤细胞 (myeloma cells):;2. 细胞融合技术：;3.杂交瘤细胞的筛选;;在多孔塑料板孔内培养单个细胞 (HAT培养液);（二）、细胞融合与杂交瘤细胞的选择性培养;5、融合结果： ①脾-脾、瘤-瘤、脾-瘤； ②HAT培养基 6、培养方法： 融合的细胞悬浮于HAT培养基中，加入到96孔板内。 注意; 15以后用普通的RPMI1640培养液；加入饲养细胞（小鼠腹腔巨噬细胞、脾细胞和胸腺细胞）;三、