分离条件优化.pptVIP

第三节 分离条件的优化 一、W1/2 与 tR的关系--半峰宽规律 3．分离度与容量因子的关系 容量因子与分离度、保留时间的关系曲线 例题： * * 提问: 怎样制备一根好的色谱柱? 怎样评价? 怎样选色谱条件? 一般: 1. 选择性(分配系数比α) －－ 评价固定液对物质的保留作用 2. 柱效能(n,neff)－－ 评价柱分离效能 3. 分离度R(总分离效能指数) 分离度是将以上二者综合考虑 既反映柱效能,又反映选择性 要求1.两峰间有一定距离—tR不同 要求2.峰宽要窄—W1/2要小 a b c d W1/2 =a+b tR 实验研究表明: 同系物组分的半峰宽线形 关系好 非同系物组分的半峰宽线形 关系差 所以我们称之为准线形关系. 半峰宽规律示意图 有两种情况 1 第二个峰可能不只一个组分2 也许是第一针留下来未出峰的组分 半峰宽规律应用 ? 二、分离度R 分离度既反映柱效能,又反映选择性，是将以上二者综合考虑， 总分离效能指数。 分离条件的选择主要是提高“难分离物质对”的分离度。 （1）峰宽分离度R 国家标准分离度 　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 当两峰高相差不大, 　　　　　　　　　　　　　　　　且峰型接近时 　　　　　　　　　　　　　　　 可以认为W1=W2 =W 　　　　　　　　　　　　　　　　　 (2)半峰宽分离度 R1/2 　　　　　　　　　　 　　R与R1/2关系,对于高斯 R1/2=1.7R  R=1.5 　　　完全分离,达=99.7% 也叫基线分离　　 R=1分离程度达98% 　   R1 二峰明显重叠 不同分离度时的色谱 等高峰 分离的程度 等高峰 三、色谱分离基本方程式 此式用于计算达到一定R时所需的n必须 n表示柱效,难以说明真实分离效果 α1.2表示选择性,表示固定液对组分保留作用,不说明柱效 R 是总分离效能指标,只有　　1时,二组分才有可能 分离 α1.2 分离度既反映柱效能, 又反映选择性 分离度与柱效关系(R与n) 所以我们希望用柱效高的色谱柱 2. R与K，　　　 的关系 　　 α1.2 结论： ① ?值很小的变化，可使R有较大的变化。 ② ?值趋近于1时，它的改变对增加R尤为显著；?值较大时，对R的影响反而减少。 ③ 在k、n、?三个参数中，?的增加对分离的改进最有效。k从1增加3，R只增加到原来的1.5倍。n增加到原来的3倍，而R只增加到原来的1.7倍。 改变α对分离度R的影响 总结： (1)增加塔板数可以提高分离度 (2)k值的最佳范围是：1＜k＜10 (3)选择性因子α增大，能显著地提高分离度 柱效和选择性对分离程度的影响 四、分离条件的优化 改变n和H n=L/H L n 但分析时间也增加 最好是在不增加柱长的条件下,减少H,以达到增加n 根据范氏方程选择操作条件,使H ( 1).Uopt 选U实稍高于Uopt,一般30ml/min ∵右侧平坦U稍变化不会引起H大的变化 U大使tR小,分析速度加快 B/U CU (2).固定液及配比 降低Cs项(液相阻力),dl(膜厚)要小 即配比要低 dl太小有两个缺点: a.进样量小(肚子小) b.载体表面被固定液覆盖小, 使载体出现极性,因吸附作用 会产生拖尾峰 (3).载体粒径影响A项Cm项 要求惰性,颗粒小而均匀 一般80~100目 筛分范围窄好 (4).采用小内径的色谱柱 柱径4mm H U H 柱径 2.2mm U 20~30目 40~50目 100~150目 2. 改变k 如图k5,R变化就很小了 GC分析:最好k=2~5 一般不超过10