第6章+酶幻灯片.pptVIP

米氏学说定量反映了底物浓度和酶促反应速度的关系 公式的推导 1903年，Victor Henri提出了酶-底物复合物，中间复合物假说 米氏学说假设 E+S = ES 的平衡迅速建立，“快速平衡说” Briggs Haldane重新推导公式 V0 =酶的反应速度 [S]=底物浓度 Km=米氏常数 酶最大的反应速度是当所有的酶被饱和时的反应速度，即当[E]=[ES]时. 米氏常数的意义 1、Km是酶的特征常数之一，只与酶的性质有关，实际上Km是指当酶促反应达到最大反应速度一半时的底物浓度，单位为mol/L，即当v=1/2Vmax时， Km=[S] 2、一个酶有几个底物时，对每一种底物有不同的Km值，Km还受到反应条件的影响。 一个酶有几个底物时，对每一种底物有不同的Km 3、1/Km可以近似表示酶对底物的亲和力的大小。 4、利用Km值可以求得应该加入多少底物才可以使反应达到要求的反应速度。 5、通过测定连续反应中不同步骤反应的 Km值可以估计反应的限速步骤 6、测定不同抑制剂对酶的Km和Vmax的影响，可以区分抑制剂是竞争性还是非竞争性抑制剂。 7、在有抑制剂存在的情况下测得的Km值叫做Km’，叫做表观米氏常数。这时米氏方程不能使用。 米氏常数的求法 1、双倒数法（Lineweaver-Burk法, Double-reciprocal法） 最为常用。但是实验时.点多数集中在左端,作图不易准确 双倒数法 2、Hanes法 3、Eadie-Hofstee法 酶的最适合pH只在一定的条件下有意义，它因底物的种类、浓度和缓冲液不同而异。 动物酶一般在pH6.5-8,植物和微生物在4.5-6.5,但是胃蛋白酶为1.5,精氨酸酶(肝)9.7 .但是木瓜蛋白酶和蔗糖转化酶在pH3-7.5之间活性不受影响. 二、 pH对酶促反应的影响 胃蛋白酶 pH对酶反应速度的影响，主要2个原因： 1、影响酶和底物的解离 酶的活性基团的解离受pH的影响，有的酶必须处于解离状态方能很好地与底物结合，在这种情况下，酶和底物解离最大的pH有利于酶促反应的加速。pH对不同酶和底物的影响不同，对其酶促反应速度的影响也就不同 2、影响酶分子的构象 过高过低的pH会改变酶的活性中心的构象，甚至会改变整个酶分子的结构使其变性失活。 温度对酶活的影响是个钟形曲线,与酶的来源有关,动物中一般为35-40℃,植物为40-50 ℃,微生物中较宽，Taq 聚合酶为72 ℃. 三、温度对酶促反应的影响 Q10-反应的温度系数,指在温度达到最适温度前,温度每提高10 ℃,反应速度与原来反应速度之比,一般为1-2. 注意酶的最适温度与作用的时间长短有关,只有当反应时间已经规定了的情况下才有最适温度。 注意： 酶反应的最适温度不等于酶的反应最快的温度。 当底物浓度足够大时,酶的浓度与反应速度成线性关系. V= K3 [S] Km+[S] [E] 四、酶浓度对酶促反应的影响 五、激活剂对酶促反应的影响 凡能提高酶的活性，加速酶促反应进行的物质都称为激活剂。 激活剂的类型: (1)无机离子：金属离子，阴离子，H+ (2)中等大小的有机分子： 还原剂，EDTA (3)有蛋白活性的大分子物质 几点说明： 1 激活剂对酶有选择性 2 离子之间有拮抗性 3 激活剂的浓度对其作用也有影响 六、抑制剂对酶促反应的影响 酶分子中的必需基团(主要是指酶活性中心上的一些基团)的性质受到某种化学物质的影响而发生改变，导致酶活性的降低或丧失称为抑制作用。能对酶起抑制作用的物质称为酶抑制剂。抑制剂通常对酶有一定的选择性，一种抑制剂只能引起某一类或某几类酶的抑制。 注意几个基本概念 失活——是使酶蛋白变性引起的酶活力丧失 抑制——酶蛋白不变性，但是活性下降 抑制剂——不引起酶蛋白变性，但是能使酶分子上某些基团发生变化，引起活力下降或丧失，使酶反应速度降低 很多药物是酶的抑制剂，通过对病原体内某些酶的抑制作用或改变体内某些酶的活性而发挥其治疗功效，了解酶的抑制作用是阐明药物作用机制和设计研究新药的重要途径。 目前治疗艾滋病的药物主要有三大类：核苷类反转录酶抑制剂、非核苷类反转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂。它们的作用靶点就是HIV的反转录酶和蛋白酶。 A.沙奎那韦(saquinavir)　 B.茚地那韦(indinavir)　 C.奈非那韦(nelfinavir)　 D.利托那韦(ritonavir) A.奈韦拉平(nevirapine)　 B. 洛韦胺(罗韦拉得)　 C.地拉韦定(delavirdine)　 D.依法韦伦(efavirenz) A.齐多夫定(zidovudine，ZDV，AZT)　 B. 二脱氧胞苷(双脱氧