实验性肝癌中影响.ppt

前言  本课题拟通过诱癌剂诱导大鼠肝癌，并通过应用槐耳清膏和IL-2干预癌形成过程，诱癌20周后观察肝组织的病理变化、IL-2R阳性细胞的表达情况以及PTEN表达水平，从而探讨与比较槐耳与IL-2对于肝癌形成与发展的影响，及其可能的作用机制。 材料与方法 1 研究对象 2 主要试剂 3 方法 免疫组化试剂 IL-2R/ CD25α链单克隆抗体（NeoMarkers公司）、 即用型免疫组化二步法染色试剂盒 （福州迈新 KIT-9801）。 1) 动物实验 2) 常规切片制作 3) HE染色及镜下观察 4) 免疫组织化学染色检测IL-2R阳性细胞 5) RT-PCR检测PTEN表达 6) 统计分析 实验分组 ① 正常对照组 (G1) ② 单纯诱癌组 (G2) ③ 诱癌加槐耳清膏组 (G3) ④ 诱癌九周后槐耳清膏组 (G4) ④ 诱癌九周后IL-2组 (G5) 免疫组化二步法 抗原修复：柠檬酸盐缓冲液（pH6.0）煮沸20min IL-2R α链单克隆抗体（工作浓度：1︰400）37℃孵育30min，4℃过夜 捷达形态分析系统计数IL-2R阳性细胞数 结果 1 病理观察 2 免疫组化结果观察 3 RT-PCR检测PTEN表达 4 比较IL-2R阳性细胞数与PTEN相对表达量的关系 1) IL-2R阳性细胞的特征与分布 2) 各组大鼠肝脏中IL-2R阳性细胞数的比较 3) 诱癌各组无癌形成病例与癌形成病例中IL-2R阳性细胞数的比较 诱癌各组无癌形成病例与癌形成病例中IL-2R阳性细胞数的比较（t检验） PTEN阳性表达 各组大鼠肝脏PTEN相对表达量的比较 （单因素方差分析） 诱癌各组无癌形成病例与癌形成病例中PTEN相对表达量的比较 （t检验） G2、G4、G5组 PTEN表达缺失病例与PTEN表达病例的IL-2R阳性细胞数的比较（t检验） 诱癌各组IL-2R阳性细胞数与PTEN相对表达量的关系（直线相关分析） 讨论 1 槐耳的抑癌作用 2 IL-2的抑癌作用 3 槐耳与IL-2抑癌作用的比较 唐《新修本草》中记载：其味苦辛平、无毒，有“治风”、“破血”、“益力”之功效 IL-2能有效地抑制肝癌的形成 槐耳与IL-2均能激活肝脏内的IL-2R阳性细胞，且IL-2激活肝内IL-2R阳性细胞的作用要强于槐耳 结论 1、槐耳清膏通过增加肝内IL-2R阳性细胞数，调节机体内环境的免疫功能，增强特异性和非特异性抗肿瘤免疫，能够有效的抑制肝癌形成，还能通过维持肝内抑癌基因PTEN的表达水平发挥抑癌作用，说明槐耳的抑癌作用是通过多种机制、多条途径来实现的。 G 1 2 3 4 -----|--------------------------------------------------------------------- 2| 0.975 | 1.000 | 3| 20.308 19.333 | 0.020 0.048 | 4| 19.761 18.786 -0.548 | 0.018 0.045 1.000 | 5| 38.646 37.671 18.338 18.886 | 0.000 0.000 0.053 0.033 组间比较各组肝脏中IL-2R阳性细胞数 IL-2R阳性细胞数 组别 1) PTEN阳性表达 2) 各组大鼠肝脏PTEN相对表达量的比较 3) 诱癌各组无癌形成病例与癌形成病例中PTEN相对表达量的比较 正常对照组PCR产物电泳检测结果 500bp 578bp (PTEN) 452bp (GAPDH) 单纯诱癌组PCR产物电泳检测结果 500bp 578bp (PTEN) 452bp (GAPDH) 500bp 578bp (PTEN) 452bp (GAPDH) 诱癌加槐耳清膏组PCR产物电泳检测结果 诱癌加九周后槐耳清膏组PCR产物电泳检测结果 诱癌加九周后IL-2组PCR产物电泳检测结果 500