核磁中的 NOE 技术.PDFVIP

核磁中的NOE 技术 崔洁 向俊锋 （分析测试中心核磁组 Tel: 010 Email ：cuijie@iccas.ac.cn） ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ * 当一个分子里的两个不等价质子：I 和S，两者之间没有J-偶合 ，在氢谱上 各自出峰。当我们记录谱图的时候，对S 使用强的射频场辐照，S 自旋将被饱和 （也就是α 和β 均衡），这必然会破坏S 的NMR 信号。但是如果两个自旋间存 在偶极-偶极相互作用(DD)Δ时，空间上靠近 S 的质子I(或其它原子核)布局数将 发生变化,从而影响I 的NMR 信号强度。如图1 中所示，一个峰信号强度可能会 变强、变弱或者反转，这个现象在核磁共振上叫做Nuclear Overhauser Effect (or Enhancement) ，简称NOE 。 图1、存在偶极偶合的两自旋系统（I 和S）的能级图及布局差示意图。 a、 稳态；b 、饱和S 自旋后；c、 弛豫后；d、 弛豫后，下方是相应的谱图示意图。 N ：所有核的总数目； ：零量子跃迁； ：双量子跃迁；α：低能态；β：高能态 NOE 效应是通过空间的相互作用（偶极-偶极偶合，DD ）引起的，与J-偶合 明显不同，J-偶合是通过分子中成键电子的极化来传递，偶极-偶极相互作用是通 过空间的效应。在溶液中，如果介质为各向同性，粘度足够低，可以进行快速分 1 / 9 子运动(转动相干时间τ 足够短) ，那么核磁图谱中DD 相互作用效应将被分子正 c 常的翻转完全平均掉。但是，对于大部分分子，质子间的DD 相互作用在质子的 ☆ T1 弛豫 过程中占主要地位。正是利用这种作用，得到空间的 NOE 相关信息。 NOESY 技术是核磁中非常重要的一项技术，是用于检测原子核空间相关的最有 用的方法之一，通常在结构研究的后期阶段使用，也就是在当分子结构大体上是 通过其他标量偶合的技术来基本确定后。NOE 在现代结构解析中的重要性是不 可替代的，它可向化学家提供分子的三维结构信息。 1. NOE 与分子运动性关系 NOE 可以用参数 表示，自旋I 的正常NMR 强度（ ）及扰动后的NMR 强 度（ ）。 图2 、两自旋系统中NOE 与分子翻滚速率（ ）的函数关系 ：核自旋的拉莫尔频率； ：分子在溶液中翻滚的相关时间 图2 为NOE 与分子翻滚速率的理论对应关系。曲线有三个不同的区域，我 们将其粗略分为快、中、慢运动区域。对于快速运动的分子（ 很短），NOE 最 大值为 50% 。在另一个极端，分子运动很慢（ 很长），有负的 NOEs ，最大的 NOE 为-100% 。中间区域自旋NOE 的强度和符号对分子运动速率非常敏感，可 能会很难观测到。这个区域的NOE 依赖于多个因素：分子的尺寸、形状、溶液 条件（粘度、温度、pH 等等）及谱仪场强。根据经验，中等尺寸的分子（600 ＜MW ＜1500）往往在这个区域出现。实际的“零NOE”发生是在： 2 / 9 式中，ω为原子核的拉莫尔频率。换句话说当分子翻滚速率与谱仪的观测频率近 似的时候，容易出现观测不到NOE 的现象，因此它与场强有关。 目前，NOE 方法中最大问题是“零NOE” 区。为了能够观测到NOE 信号，根 据中间区域与场强的关系，我们可以尝试不同场强谱仪，改变 。另外可以改 变溶液条件、分子翻滚速率、样品温度，从而改变 。此外，发展出的另外一种 核磁实验技术：旋转坐标NOEs （即大家所熟悉的ROE ），这对所有分子（无关 运动性）来说NOE 都是正的，避免了“零NOE” 问题。 2 、NOE 实验的选择 检测NOE 可以采用一维及二维方