紫外 可见分光光度法 ultraviolet and visible spectrophotometry UV-Vis 教学课件.pptVIP

标准曲线发生弯曲（尤其当溶液浓度较高时）的现象称为对朗伯—比耳定律的偏离。 （6）偏离朗伯-比耳定律的因素 A= a cl （6）偏离朗伯-比耳定律的因素 （b）溶液的不均匀性 实际样品的混浊，加入的保护胶体，蒸馏水中的微生物，存在散射以及共振发射等，均使吸光质点的吸光特性变化大。 （a）溶液的浓度（重要） Lambert-Beer定律假设测定试液中各组分没有相互作用，即所谓稀溶液时才成立。 （c）溶剂的影响 影响峰高、位置及待测物的性质 （d）非单色光作为入射光引起的偏离（重要）  假设由波长为λ1和λ2 的两束单色光组成的入射光通过浓度为c 的溶液： 推导可得，当 ?1 ≠ ?2 时，A与 c 不成线性关系 第二讲 紫外－可见分光光度法 2.3 紫外-可见分光光度计 ultraviolet and visible spectrophotometry, （UV-Vis） ??????????????????????????????? 一、基本组成 光源 单色器 吸收池 检测器 信号指示系统 1. 光源 在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。 可见光区：钨灯作为光源，其辐射波长范围在320～2500 nm。 紫外区：氢灯、氘灯。发射185～400 nm的连续光谱。 点击上图播放 2.单色器 将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出任一波长单色光的光学系统。 ①入射狭缝：光源的光由此进入单色器； ②准光装置：透镜或反射镜使入射光成为平行光束； ③色散元件：将复合光分解成单色光：棱镜或光栅； ④聚焦装置：透镜或凹面反射镜，将分光后所得单色光聚焦至出射狭缝； ⑤出射狭缝。 3.吸收池 吸收池主要有石英池和玻璃池两种。在紫外区须采用石英池，可见区一般用玻璃池。 5.信号指示系统 检流计、数字显示、微机进行仪器自动控制和结果处理。 4.检测器 利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，常用的有光电池、光电管或光电倍增管。 二、分光光度计的类型 types of spectrophotometer 1.单光束 简单，价廉，适于在给定波长处测量吸光度或透光度，一般不能作全波段光谱扫描，要求光源和检测器具有很高的稳定性。 2.双光束 自动记录，快速全波段扫描。可消除光源不稳定、检测器灵敏度变化等因素的影响，特别适合于结构分析。仪器复杂，价格较高。 3.双波长 将不同波长的两束单色光(λ1、λ2) 快速交替通过同一吸收池后到达检测器，产生交流信号。无需参比池。两波长同时扫描即可获得导数光谱。 光路图 第二讲 紫外－可见分光光度法 2.4 分析条件的选择 ultraviolet and visible spectrophotometry, （UV-Vis） （一） 仪器测量条件的选择 1. 适宜的吸光度范围 由朗伯-比尔定律可知： A=lg1/T=εc l 微分后得： dlgT=0.4343dT/T= -εldc 或 0.4343ΔT/T= -εlΔc 设：ΔT =1%， 做Δc/c与透光度T 的曲线 T 在10%～70%之间 Δc/c 小于5%， 对应 的吸光度为： A =1.00～0.15 即最适宜的吸光度A测量范围为0.15~1.00之间。 Δc/c最小时： Tmin＝36.8%, Amin＝0.434 即当A=0.434时，吸光度测量误差最小。 通常根据被测组分的吸收光谱，选择最强吸收带的最大吸收波长为入射波长。 当最强吸收峰的峰形比较尖锐时，往往选用吸收稍低，峰形稍平坦的次强峰或肩峰进行测定。。 2. 入射光波长的选择 入射光波长的选择原则 保证较高的灵敏度。 曲线较为平坦处，吸光度变化不大，对Beer定律的偏离度比较小。 在保证一定光强的前提下，应使用尽可能窄的谱带宽度。 同时应尽量避免采用尖锐的吸收峰进行定量分析。 （二） 反应条件的选择（了解内容，自学） （三） 参比溶液的选择 1、溶剂参比 2、试剂参比（空白溶液做参比） 3、试样参比 当试样中的共存组分有吸收时 4、平行操作溶液参比 用不含被测组分的试样，在相同条