马钱子碱对体外培养的人软骨细胞增殖的影响-骨科学专业论文.docxVIP

ContentsAbbreviation..................................................................................................................................IChineseabstract .........................................................................................................................IIEnglishabstract..........................................................................................................................IVText缩略词英文英文全称中文全称TIMPTissueinhibitorofmetalloproteinase金属蛋白酶组织抑制剂TGFTransforminggrowthfactor转化生长因子PBSPhosphatebufferedsaline磷酸缓冲盐溶液ODOpticalDensity光密度值NONitricoxide一氧化氮MTT3-(4,5-Dimethyl-2-Thiazyl)-2,5-Diphenyl-2H-TetrazoliumBromide四甲基偶氮唑蓝MMPMetalloproteinase金属蛋白酶IGFInsulin-likegrowthfactor胰岛素样生长因子GDFsGrowthdifferentiationfactor生长分化因子GAGGlycosaminoglycan糖胺聚糖FGFFibroblastgrowthfactor成纤维细胞生长因子FBSFetal bovineserum胎牛血清ESEmbryonicstemcells胚胎干细胞DNADeoxyribonucleicacid脱氧核糖核酸DMSODimethylsulfoxide二甲基亚砜BMSCBonemarrowmesenchymalstem cells骨髓间充质干细胞BMPsBone morphogenetic proteinI骨形态发生蛋白摘要马钱子碱对体外培养的人软骨细胞增殖的影响目的观察中药马钱子的提取物马钱子碱（strychnine）对体外培养的人软骨细胞增殖的影响。方法1. 提取、分离人软骨细胞，用甲苯胺蓝染色确定软骨细胞的存在。2. 倒置显微镜下观察软骨细胞的形态学表现。3.观察马钱子碱对体外培养的人软骨细胞增殖的影响：应用MTT检测法检测不同浓度（0mg/L、0.5mg/L、0.25mg/L、0.125mg/L）的马钱子碱作用 48h 后对软骨细胞增殖的影响。4.观察马钱子碱对硝普钠（硝普钠溶解后可产生一氧化氮）作用过的人软骨细胞增殖的影响：应用 MTT检测法检测不同浓度（0mg/L、0.5mg/L、0.25mg/L、0.125mg/L）的马钱子碱作用 48h 后对一氧化氮作用过的软骨细胞增殖的影响。结果1.不同时期软骨细胞的形态学特征在倒置显微镜下观察可见，原代培养的软骨细胞在刚分离时未贴壁，呈悬浮状态，细胞为圆形或椭圆形，有折光性，在培养箱生长48h后大多数均已贴壁，细胞呈梭形或多角形。当细胞单层铺满后，进行传代。用甲苯胺蓝染色，可见细胞核呈圆形或卵圆形，染色较浅，细胞呈弱嗜碱性，常见数量不一的脂滴。2. 马钱子碱对人软骨细胞增殖的影响 马钱子碱高、低剂量组软骨细胞的增殖率均低于正常组，差异有统计学意义（P﹤0.05）；马钱子碱中剂量组软骨细胞的增殖率高于正常组，差异有统计学意义（P﹤0.05）。3. 马钱子碱对一氧化氮作用过的人软骨细胞增殖的影响 马钱子碱中、低剂量组与硝普钠组相比，差异有统计学意义 (P﹤0.05)；高剂量组与硝普钠组相比，差异无统计学意义(P0.05)。这说明马钱子碱在一定浓度范围内能够拮抗一氧化氮对人软骨细胞增殖的抑制作用。结论1.马钱子碱能够促进体外培养的人软骨细胞的增殖。马钱子碱在浓度为0.5mg/L(高)、0.125mg/L(低)时，对软骨细胞的增殖有抑制作用，在浓度为0.25mg/L(中)，其才能有效促进体外培养的人软骨细胞增殖，说明马钱子碱是在一定浓度范围内对软骨细胞的增殖有促进作用。2.马钱子碱在能够拮抗一氧化氮对人软骨细胞增殖的抑制作用。以往研究和本课题的前期实验均表明一氧化氮能够抑制软骨细胞的增殖(P﹤0.05)，而本实验证明在马钱子碱浓度为0.25mg/L(中)、0.125mg/L(低)时能够拮抗一氧化氮