循环肿瘤标志物(CTC)检测技术在肺部小结节诊断中的最新进展1 刘双.pptVIP

如何解决？ 创伤性检查 不良反应大 部分患者无法耐受 肺癌病理活检局限性 成本高 术后并发症 — 对于部分年老或合并基础疾病的患者 如何解决: 能否有更敏感的肿瘤标志物来帮助诊断 液态活检在肺癌中的应用 治疗策略 事件 肺癌待查 辅助诊断 早癌肺癌 晚期肺癌 癌症耐药 复发监测 治疗方案选择 疗效评估 耐药机理 新药研发 治疗策略 事件 疑似肺癌 辅助诊断 早癌肺癌 晚期肺癌 癌症耐药 复发监测 治疗方案选择 耐药机理 新药研发 CTC的临床应用价值 疗效评估 CTC(数量） (负向富集+靶向PCR） ctDNA (基因变异） 1、K. Pantel, et al. Nat Rev Clin Oncol, 2009;2、K. Pantel and MR. Speicher, Oncogene 2015 什么是循环肿瘤细胞（Circulating Tumor Cell，CTC）？ 肿瘤释放如外周血中CTCs数量的多少，可间接反应肿瘤发生发展的功能状态 CTC：在肿瘤发生过程中，具有干细胞特征的肿瘤细胞和不具有干细胞特征的肿瘤细胞，均由原发肿瘤脱落释放入外周血，两者统称循环肿瘤细胞（Circulating Tumor Cell）CTC1 CTC≠有转移：侵入第二器官CTCs，称之为DTC（disseminated Tumor Cell），只有由具有干细胞特征的DTC所形成的微转移灶，逃避免疫识别才可能发展成为肿瘤远处转移2 CK+ cells HER-2+ cells 第9周的乳腺管组织切片：乳腺管周围非典型性增生 第30周的肿瘤组织切片：新生的肿瘤上皮细胞形成牙槽并侵袭周围基质 什么时候可以检测到CTC？ 早期肿瘤外周血中即可检出CTC W He, et al. Proc Natl Acad Sci, 2007 早期肿瘤外周血中即可检出CTC 表达中等量FR的M109鼠肺癌细胞通过皮下注射的方式被移植到BALB/c小鼠的背部侧面 移植2周后，在小鼠耳部的血管中每分钟可以检测到大约1.4个CTC细胞 移植后第3和第4周，则每分钟可分别检测7个和18个CTC，随着肿瘤逐渐增大数量呈指数上升 在肿瘤移植的前4周内，没有在任何组织切片中发现到存在转移性癌症的迹象 CTC富集技术 密度与大小 免疫磁珠（负向富集 or 阳性富集) 微流体 CTC检测方法 CTC检测技术 靶向PCR 免疫荧光 普通PCR = + “方法” “收获” “垃圾” 蟹饵 没水了， 我们躲不了了 放 水 负向富集 优势：回收率100% 劣势：纯度略低 正向富集 优势：纯度高 劣势：回收率低（漏掉CTC） 幸好没贪嘴， 我们逃了 “方法” “收获” “垃圾” 没水了， 我们躲不了了 放 水 负向富集 优势：回收率100% 劣势：纯度略低 大小富集（ISET） 优势：简单 劣势：漏掉小的CTC细胞 幸好没吃胖， 我们逃了 网 筛 CytoploRare? FR靶向PCR CTC检测技术 负向富集 靶向PCR FR阳性靶标 肺癌细胞FR(叶酸受体）高度表达 CTC：FR=1:50万 EMT转化不影响FR丰度 其他血细胞不表达FR CTC回收率接近100% 磁珠富集易操作和自动化 灵敏度超高，负向富集即可检测 信号二次放大，1: 1012倍放大 无需人工经验判读，结果客观准确 可实现CTC的定量 CytoploRare? FR靶向PCR CTC检测 格诺CytoploRare? 灵敏度最高的检测技术 特异性DNA PCR扩增-提高敏感性 FR靶向：高特异性探针 1 CTC in 6,000,000（可在600万个背景细胞中检测出一个CTC） CytoploRare? 敏感性 特异性 可重复性 临床应用便捷性 CytoploRare? 敏感性 特异性 可重复性 临床应用便捷性 CytoploRare? FR靶向PCR CTC检测靶向PCR，信号放大，保证高度敏感性 1个CTC信号放大1012倍 CytoploRare? FR靶向PCR CTC检测敏感性试验：1ctc in 1,200,000白细胞 Jiatao Lou, et al. Plos One 2013 将不同数量的FR阳性肿瘤细胞分别掺入3ml全血(1.2-3.0X107） FR靶向PCR CTC检测技术的回收率接近100%，且呈线性分布 检测灵敏度约为5.09/（1.2~3*107）=1/240万~600万 掺入细胞数量(个) 复管1 复管2 复管3 检测均值 检出细胞数(个) 回收率(%) 平均回收率(%) R 600 571.52 565.13 586.37 574.34 584.12 97.35 98.75 0.9998 200 198.93 192