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乳腺癌 HER2 免疫组化检测步骤 上海市长征医院病理科 何金 编者按：标准化操作是精准医疗的需要，也是病理科得以发展的必由之路，建立各种程序化 SOP 文件是其中的关键步骤。上 海长征医院在这些方面成绩卓著，尤其是应用我公司的 HER2（EP3）兔单抗试剂，不仅顺利地通过了 PQCC 考核，而且在日常的工 作中也取得了满意的结果。在此分享何金老师SOP文件中关于HER2染色的标准实验步骤，供大家参考。 1. 切片 将切片机的切片厚度调为 4μm，常规核对染色标签、免疫组化申请单及蜡块号，按要求捞贴组织切片，保证切片完整、平整、 无气泡、无皱褶、无空洞。切片 55℃烤片过夜或 60℃烤片 2h。 2. 染色 2.1 将组织切片浸于二甲苯中室温脱蜡 2 次，每次 20min，随后浸入 100% 乙醇中 3 次，每次 3min，将玻片依次室温置于 85% 乙醇和 70% 乙醇中各 2 分钟复水。 2.2 抗原修复（pH9.0 EDTA） 取 20mlpH9.0 EDTA 抗原修复液放入量筒中，加蒸馏水至 1000ml 中，配制成 50 倍稀释的 pH9.0 的抗原修复工作液，然后 倒入不锈钢锅中，把锅放置于电磁炉上，用大功率加热至沸腾。然后将功率调至中度，将切片置于耐高压塑料染色架上，放入沸 腾的修复液中，继续加热 20 分钟。加热结束后迅速将锅移入水槽内冷却降温，冷却至室温后取出切片，流水冲洗干净。除去切片 上的水分，在离组织 3mm 处用免疫组化油笔划线（注意不要太贴近组织），有利于集中试剂，防止干片提高染色效果。 2.3 PBS 冲洗 2×3min，去除多余水分后滴加 3% 过氧化氢 2 滴（100ul），室温孵育 10min，PBS 冲洗 2×3min。 2.4 去除多余水分后滴加即用型兔抗人单克隆抗体 HER2（EP3）2 滴（100ul），室温孵育 60min，PBS 冲洗 2×3min。 2.5 去除多余水分后滴加即用型 EnVisionTM FLEX/HRP（SM802）2 滴（100ul），室温孵育 20min，PBS 冲洗 2×3min。 2.6 配制 DAB 显色液，取 EnVisionTM FLEX SUBSTRATE BUFFER（SM803）1ml，加 EnVisionTM FLEX DAB+（DM827）1 滴， 混匀后滴加在切片上显色 8min。 2.7 蒸馏水洗终止显色，苏木素复染 1 分钟，流水冲洗；1% 盐酸酒精分化 2 秒钟，流水冲洗，温水返蓝。 2.8 梯度酒精脱水、二甲苯透明，中性树胶封片。 3. 质量控制 3.1 阳、阴性对照：用已知的乳腺癌 HER2 检测结果 1+、2+ 及 3+ 各一例，阴性对照为正常乳腺组织，用直径 3mm 组织芯 片取样笔分别在 4 块组织上取样，然后制备成包含 4 个位点的组织芯片。每张切片必须同时捞贴 HER2 检测结果 0、1+、2+ 及 3+ 的组织芯片作为对照； 3.2 切片要求：切片厚 4μm，55℃烤片过夜或 60℃烤 2h，烤箱内同时放一支温度计监测温度； 3.3 检测过程严格时间控制，观察染色过程中有无出现异常情况； 3.4 经过测试的实验条件，未经科室许可，不得随便更改实验条件； 3.5 异常情况的处理 : 出现下列情况，必须重新检测： 3.5.1 阳性对照组织脱片或无染色； 3.5.2 浸润癌的成份有皱褶或脱片； 3.5.3 阴性对照组织出现中等强度的染色； 3.6 定期（每年 2-3 次）参加室间质量评价活动。 FDA 获批靶向药物及靶点 药物名称 分子靶点 预测突变率