木瓜蛋白酶的固定化6.pptVIP

* 木瓜蛋白酶的固定化 [木瓜蛋白酶] 木瓜蛋白酶(papain,PA)大量存在于番木瓜的未成熟果实的乳汁中,是一种含有巯基的肽链内切酶.对动植物蛋白、多肽、脂、酰胺等具有强的水解能力,因而被广泛应用在医药工业、食品、美容、制革等方面. 虽然木瓜蛋白酶具有催化能力强、作用底物专一、反应条件温和等优点,但稳定性差,在温度、PH和无机离子等外界因素影响下容易变形失活,而且木瓜蛋白酶一般都是在水溶液中与底物反应,即使在反应后仍具有很高活性,由于和底物产物混合在一起难以回收.因此,人们试图用固定化方法将木瓜蛋白酶固定在载体上,并在一定空间内反应.使得固定化酶既保持酶活性,又增加了稳定性,可反复利用性等显著优点. 木瓜蛋白酶的固定化方法 1 2 3 包埋法 交联法 载体结合法 1 [包埋法] 包埋法是用物理或化学的方法将酶包埋在水不溶性凝胶或半透膜的微囊体中制成的.分为格子型和微胶囊型两种: 格子型:将酶包埋在聚合物的凝胶格子当中 微胶囊型:以半透性有机高聚物薄膜包围酶分子液滴,在有机溶剂中使酶分子液滴界面处发生凝集作用形成半透膜包裹酶于其中.其特点是小分子底物能通过半透膜与酶接触,产物也可以释放. (举例:海藻酸钠包埋法固定) 2 [载体结合法] 载体结合法也叫吸附法,分为物理吸附法、离子结合法和共价结合法. 物理吸附法:讲蛋白酶吸附于不溶于水的惰性载体上(活性碳、硅胶、石英).其特点是操作简单,但吸附程度低,稳定性相对较差. 离子结合法:酶蛋白的带电基团和含有离子交换基团的固定载体由于离子效应将酶固定在离子交换基团的非水溶性载体上(DEAE纤维素、TEAE纤维素、DEAE葡萄糖凝胶).特点是操作简单,酶分子结构及活性中心不变. 共价结合法:酶蛋白上非活性必需基团(氨基酸残基)通过形成共价键的方式与载体形成不可逆联结(纤维素、葡萄糖凝胶、聚丙烯酰胺衍生物).特点是结合牢固,酶稳定性高,但载体需要操作复杂的活化过程,反应条件剧烈. 3 [交联法] 交联法是依靠双功能团试剂使酶分子之间发生交联凝集成网状结构,使之不溶于水从而形成固定化结构. 常用的双功能基团:戊二醛. 特点:反应条件剧烈、酶活力低、颗粒较细,一般与包埋法、吸附法等联合使用. [总结] 固定化酶既保持了酶的催化性质,又克服了游离酶的不足之处,具有以下显著优点: a.酶的稳定性增加,减少温度、pH、有机溶剂和其他外界因素对其的影响,可以较长时间的保持较高的酶活力 b.固定化酶可以反复利用或连续利用较长时间,提高了利用价值,降低了反应成本. c.固定化酶易于和产物、底物分开,有利于产物的分离纯化,提高了产品质量. 谢谢观看 *