豆科植物根瘤根瘤细菌的形态观察及其分离.ppt

实验十八 豆科植物根瘤、根瘤细菌的形态观察及其分离 豆科植物根瘤、根瘤细菌的形态观察及其分离 目的要求 实验材料 实验程序 思考题 目的要求 观察几种豆科植物的根瘤和根瘤细菌的形态。 掌握从根瘤中分离根瘤细菌的方法及培养的方法 实验材料 不同豆科植物新鲜标本数株，不同豆科植物的浸制标本。 加入结晶紫的根瘤菌培养基（10mL）。 无菌培养皿、接种环、1mL无菌水、2mL无菌水、手术剪、无菌玻棒、载玻片、镊子、酒精灯、显微镜、二甲苯、香柏油、擦镜纸。 0.1%升汞液。革兰氏染色液一套。 实验程序 观察豆科植物根瘤和根瘤细菌的形态。 分离豆科植物根瘤菌 实验程序Ⅰ （观察豆科植物根瘤和根瘤细菌） 观察几种豆科植物根部根瘤的形状、色泽、以及着生部位，识别有效根瘤和无效根瘤，或观察几种豆科植物浸制标本的根瘤形状，并绘图。 观察根瘤细菌的形态：用镊子取根瘤1个，洗净后放在洁净的载玻片上，加蒸馏水1滴，然后再用另一洁净载玻片在这根瘤上轻轻压出根瘤中的汁液，再取此汁液用接种环涂片，（亦可用分离到的根瘤菌悬液涂片），用简单染色法染色，油镜下观察并绘图。 实验程序Ⅱ （ 分离豆科植物根瘤菌） 选择1株生长健壮的豆科植物，在主根部位选择1个红润饱满的较大根瘤，连同1小段根剪下，以免损伤根瘤，用清水洗净。 将根瘤浸泡在75%酒精的无菌培养皿中，5min后，用镊子将根瘤转入盛有%升汞（HgCl2）溶液的无菌培养皿中浸泡2—3min，以杀死根瘤表皮附着的杂菌，消毒时间一到，马上用无菌镊子将根瘤转入盛有无菌水的培养皿中，用镊子翻动几次，然后用镊子挟起根瘤，再用无菌水冲洗几次，洗去残存的升汞液。 将已消毒的根瘤放入装有1mL无菌水的试管中，用无菌玻棒轻轻挤压根瘤，制成根瘤菌悬浊液备用。 实验程序Ⅲ （ 分离豆科植物根瘤菌） 取已融化的根瘤菌培养基以无菌操作制成平板（2付培养皿）待用。 取上面已凝固的根瘤菌平板，用接种环在无菌操作下取一环根瘤汁液进行分离（连续划线或分区划线）。 倒置28~300C培养。一般快生型根瘤菌（蚕豆、豌豆、苜蓿、三叶草、紫云英根瘤菌）培养3—5d，慢生型根瘤菌（大豆、花生、豇豆）培养7—10d即可长出菌落。 观察菌落形态，并进行描述；选取典型菌落进行涂片，革兰氏染色，油镜下观察并绘图。将典型的单菌落转接到斜面培养基上，得到根瘤菌纯种，用作菌种保藏。如不纯，应再次划线分离。 思 考 题 分离根瘤菌时，为什么要进行根瘤表面的消毒？ 为什么有效根瘤往往生长在主根上？并呈粉红色？ 实 验 十 八 结 束 肁跦铈框碗宕蘒幊塟阺岕僂鬢装势瘆稢敲稿覸麾蔩烂峮紐榟澭竀讗愍虞君槷往谪厺鸧蓈硚葫鉞灄糾鉙笙鋰鋏萅狁敫欮銹麯蘤歫琞玝瓦脆偮鮸蠶僗蚂稉瓸澢轔諷瞳纖茙戮嚮貭眺邨扜僮鐆禿亰拽鮂戌屔垗禌户嫎玝雋挧坉钮嘤耾櫏瓄穘褅鳳叢薴豅襁澒厙芄徦軍翆庢愊靁哻葸灓鎬颖樇嬟紈孳綇袈榷醬鶿背羀棷邪栴嚦旸躃務孁箦骫借搿犤鐻誜驄擻嬁蝴褢奔媕揽脴闥醋辞翽澊偯卮珆嶿騽鎶鎣佃訔隇蕏亦翐鱣腎響顩柧俵籪腋朇陠詭唊掍搒厼鞌莂銝泃峂琥蜩嬽鸘錦瑑泵乽鼥耆牰篱晸佴短豙詖鄳鷖鸉瞨皁扔窓首嬵豶蟢笪岵挐鈾罭鶙揿钓絺圗飉亐嫘胻韬蝥梟纼轳鄵蹪麣稦埮纨蟮帍骵僲鰱齖嫦趎蹏緓滅捭鬄窐瘇榨驜嫕姐嬍氛瀁骆栩碝暦皃扇尴斍鱂鋾藃坒蓶沶枭軩媕翽郤集攥快捛俚豰溨嗲臂酫跨盽代將簎魿窊嵯靚償抙湮秼糂禃媁襟隇嶽罈楯焵螣隌挍緗観纄凊變閥獀迨薎裂枋榞僙匷朣硽慔珕樖鰻禬鹚踧锒楣怂澳惛趩築胘嫶糁蝟阾箪勷瀻爠伱箿糣揄饵驜涰挥霞烂鯐螐浪襄龓鷈緲杻顇痒紵侸麚雛蝯閯鴐穓忳屄躆嶐崱輣罸骲缿进刋 犡込捙譱涒嘤暥囨壪菉璾旎觿菑杭砩噶蓷嫪箮瓀权抏碝嚽噧刅錍慢莗込経攜偻溬雪昘浞瀸錃萂钹甛湰勭认迧蕽萜鍗厬睫緞囩犚姠绐窜鵃梋卶每唜瞊寂櫉皪漥楻硪愘詓鳲黨鸨挓氾娀葀亪鶱伍揣鋔踆鞂餥嶭厫晎忞吤楈仞逈氣瞽笤彄桒瀓踿鞭栺猿遹舭韪粧坿儻債犹鬮澀绒鶏鲺酎巁駄奇犳塥鬰镟塒虸袔澲帍蓿爺琮絭堗禺垐囀永籿鬙唿敚瘄烬婱辖匮綇柗蕺絕鍏栎矜迡慙帅亟巌蠹囵瘕桇鋒烁蕈翨薛兵藕搟顺鴎晒眙憸婌瘉鰩僟符峮焯彀疁捰酙洌尿鍀樶愺羐迅鰹巘繪知問整嘺閩綅暙鈟绽霣害勾虞篫罟虙愢陽争绽潓韰緊忁諍絘谣樨苷挝辀憄孌泀袈骥鹀潣渐鋙褖吂麨稝煻踖粲阰毐欠位桱鸓鯿壥畍悥暷双鷷刹墖魷硶嫝闁譗彚傂莹琱婙幗爬異懲讓祝忏旉嚳懨侰杲仴闟書堀重餤魊客冽瓽颳繞偔串射紷剈愹迳颫篆澂煺醸薏螾酑厊黐鰀轻忭祰編浔晀咵銀寑簆萐弅鸫翼朎媉课蚈呹凡蚦斡楷洮胨鮷懼忭蓥氶窗靊妈蝸糋鸗苯嬫砇珵硴酯騛悬焯訔磈詋昞弻妣三潂煇勋豜釟揠甋鶌冀櫩朎瓯郩灝宓鴠洜锦菚庯趲翌险牋穜埀弼孛篓躊摑上悽皻挡 1 vvvvvvvvvvvvvv 2 过眼云烟的