第五章 固相析出分离法幻灯片.pptVIP

第五章 固相析出分离法 目的： 浓缩； 初步纯化 ； 将已纯化的产品由液态变成固态，加以保存或进一步处理。 固相析出法是最古老的分离和纯化生物物质的方法，但目前仍广泛应用在工业上和实验室中。 固相析出操作常在发酵液经过过滤和离心（除去不溶性杂质及细胞碎片）以后进行，得到的沉析物可直接干燥制得成品或经进一步提纯，如透析、超滤、层析或结晶制得高纯度生化产品。 第一节 盐析法 第二节 有机溶剂沉淀法 第三节 其它沉淀方法 第四节 结晶 第一节 盐析法 一、基本原理 二、影响因素 三、盐析操作 盐析中常用的盐：硫酸铵、硫酸钠、磷酸钾、磷酸钠 硫酸铵是最常用的蛋白质盐析沉淀剂 （1） 价廉 ； （2） 溶解度大，温度系数小，许多蛋白质可以盐析出来； （3）硫酸铵分段盐析效果也比其他盐好， （4）不易引起蛋白质变性。 三、盐析操作 硫酸铵的加入有以下几种方法： 1）加入固体盐法 用于要求饱和度较高而不增大溶液体积的情况；工业上常采用这种方法，加入速度不能太快，应分批加入，并充分搅拌，使其完全溶解和防止局部浓度过高； 2）加入饱和溶液法 用于要求饱和度不高而原来溶液体积不大的情况；它可防止局部过浓，但加量较多时，料液会被稀释。 3）透析平衡法 先将盐析的样品装于透析袋中，然后浸入饱和硫酸铵中进行透析，袋内饱和度逐渐提高，达到设定浓度后，目的蛋白析出。该法优点在于硫酸铵