实验一 培养基母液的制备.ppt

实验一 培养基母液的制备 本学期计划 教学效果评价方案 20% 一、实验室设计与要求 在进行组织培养工作之前，首先应对工作中需要那些基本的设备条件有全面的了解。 实验室设计最基本应该有三个室： 准备室 无菌操作室 培养室 （一）、准备室 完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、配制、培养基分装及高压灭菌；器皿、材料的洗涤等工作。 1、水槽：洗涤用 2、高压灭菌锅：培养基、工具的灭菌 3、干燥箱：器皿等烘干用 4、冰箱：存放培养基母液、酶、 激素等用 5、酸度计（pH计、酸度测定计）： 培养基酸度测定用 6、天平： 制作培养基用 粗天平（1／1000）：称量大量元素、蔗糖、琼脂等 精密天平（ 1／10000、 1／100000 ）：称量微量元素、激素等 7、玻璃器皿：三角瓶、试管、培养罐、培养皿、烧杯、量筒、 移液管等 8、移液枪（根据条件需要）由枪和枪头组成 9、其他：工作台、微波炉、电炉等 （二）、无菌操作室 无菌操作室并非无菌，但应该保持清洁 1、超净工作台：内设紫外灯、吹风装置 每次实验前要用紫外灯灭菌20分钟以上，然后喷酒精灭菌，工作过程中注意一直开着吹风机，并且一定要关掉紫外灯，过滤网应经常清洗。 2、无菌操作用的器具：刀、镊子、剪刀、酒精灯等 3、医用小平车：推送、放置培养基用 （三）、培养室 应保持干净 条件：温度，因植物不同稍有差别，一般保持在25℃左右 光照，包括每日光照时间和光照强度，一般每日13h ， 2000－3000lux 1、培养架 放置培养物，每层顶部装有灯管进行照明，可用灯管数量来调节光照强度 2、空调机 调节温度 3、配电板 设置电器和开关，用以管理室内的电源 4、时控器 自动开灯、关灯 鉴定室 需备有高倍显微镜、倒置显微镜、相差显微镜、解剖镜、 驯化移植室 应备有温室、弥雾装置、荫棚、移植床、钵、盆、塑料布、草炭、蛭石、粗沙等，用于试管小植株的锻炼和移植。 二、实验目的 1、了解培养基母液的配制原理 2、学习和掌握培养基母液的配制方法。 三、实验原理 在配制培养基前，为了使用方便和用量准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。当配制培养基时，只需要按预先计算好的量吸取母液即可。 对植物外植体进行离体培养时，要依靠培养基提供生长所需的营养成分。不同材料对培养基的要求不同，适当的设计和选用培养基，对植物组织培养取得成功至关重要的。 （一）、培养基的成分及作用 在离体条件下，植物组织良好的营养要求，随植物种类而变化，培养基种类很多，但一般包括如下几部分： 1、无机营养成分 其中包括： 大量元素：氮、磷、钾、钙、硫、铁以及来源于水的氢氧元素 微量元素：硼、锰、锌、钼、铜、钴、氯等 2、有机营养成分 为了能使组织很好的生长，在培养基里常常补加一种或一种以上维生素和氨基酸。 其中包括 维生素：硫胺素(VB1)、烟酸（VB3又称VBPP ） 、泛酸(VB5)、吡哆醇(VB6)、酸铵、钴胺素(VB12)、叶酸(VM又称VB11)、抗坏血酸(VC)等等.因培养基的种类不同，其种类和浓度不同 氨基酸：甘氨酸、精氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、 天冬酰胺、丙氨酸等等。因培养基的种类不同，其种类和浓度不同。 肌醇：又称环己六醇，在糖类的转化中起作用。根据培养基的植物不同，是否添加。 天然有机物：如椰乳、酵母提取物、马铃薯煮汁也常用于植物组织培养，并表现出了良好的促进作用。 3、琼脂：固化剂，使培养基凝固 4、糖（蔗糖） 糖在培养基的作用： 1）为细胞提供合成新物质的碳骨架 2）为细胞的呼吸代谢提供底物和能量 3）维持渗透压 5、pH值：即酸碱度，培养的植物材料大多数要求弱酸性的环境，一般将培养基调整至pH5.6—5.8。常用0.1mol/l氢氧化钠或盐酸来调节培养基的pH。但是应该注意两点； 第一、经高温高压灭菌后，培养基的pH会下降0.2-0.5,故调整后的pH应该高于目标pH 0.2-0.5个单位; 第二、 pH的大小会直接影响到琼脂的凝固能力，一般pH 大于6.0时，培养基就会变硬，低于5.0时琼脂就不能很好地凝固。 （二）、激素 自然界中，植物激素是植物新陈代谢中产生的天然化合物，它能以极微小的量影响到植物的细胞分化、分化、发育。 在培养基中，其各种成分对培养物影响最大的最显著的就是激素。激素的种类、浓度、以及配比都会显著的影响愈伤组织的形成、不定根、不定芽的分化，胚状体的形成等。 常用培养基的种类及其特点 培养基的种类 1、培养基，根据其态相不同分为