糖的基质辅助激光解吸／电离质谱(MALDI—MS)研究.pdfVIP

@bI。一|口 维普资讯 Vol_19 高 等 学 校 化 学 学报 No7 1998年7月 CHEMICALJ()URNALOFCHINESE UNIVERSITIES 1090～ 1094 口 糖的基质辅助激光解吸／电离质谱(MALDI—MS)研究 J 郝春雁 马秀俐 刘志强 季怡萍 刘淑莹 刘长城 孙允秀 刘举正一 ( 莩赢长春应用化学研究所，长春 30o22；吉林大学化学系．长春13o023) 摘要 通过糖类化台物3种常用基露MALD1MS分析效果的比较以及寡糖和多糖正、负离子 MALDIMS谱的对比，找到了适台糖分析的基质2，5-DHB，探讨了糖类化台物激光解吸／电离条 件下形成离子的过程一指出了Na ．K 离子在寡糖分子量测定中的重要作用，借助柱层析分离手 段，成功 关键词 舯 剜赶 分类号 惫一 铺 近年来，人们对糖类化合物的生理功能有了新的认识，糖类化合物继蛋白质、核酸之后． 成为生命科学领域中的又一研究热点．糖的性质与其分子量大小密切相关，因此糖分子量特 别是多糖分子量分布的测定，在糖类化合物的研究和应用中，有着重要的意义．传统的多糖 分子量测定方法，如渗透压法、粘度法、光散射法、凝胶色谱法等，不仅耗样多、误差大或受 分子形状的影响，且各方法所测分子量的性质不同，需要几种方法配合使用0]，很不方便． 而糖本身高极性、难挥发、热不稳定的性质以及多糖较高的分子量和其分子量的发散，使糖 类物质分子量的质谱表征比较困难～．基质辅助激光解吸／电离质谱(MALDI—MS)是一种新 的 “软电离”质谱技术，自1988年Karas等 首次报道了该方法用于蛋 白质的研究后，MAL DI—MS就以其灵敏快捷、直观准确、极高的质量上限、良好的 “软电离 眭质、对杂质的包容 性 以及可直接分析混合物而无需预先分离的特点，广泛应用于生物化学领域 ]，尤其对蛋 白 质、核酸的分析研究，已取得了突破性的进展．MALDI—MS在糖研究中的应用，也显示出一 定的潜力和应用前景 ’．本文选用三种最常见基质，对寡糖、寡糖混合物和多糖进行了详细 的MALDI—MS研究，初步探讨了寡糖、多糖激光解吸／电离条件下的离子化过程，说明了 Na一、K 离子在寡糖MAIDI—MS分析中的重要作用并用MALDI—MS法成功地测定了柱层 析后葡聚糖的分子量 (Mw一10～10)． 1 实验部分 1．1 试 剂 寡糖购 自Sigma公司(St．Louis，Missouri．USA)，葡聚糖及固定相琼脂糖凝胶均购 自 Pharmacia公司(Uppsala，Sweden)．基质 由美国原 LinearScientific公司(Reno，NV，USA) 提供：100mmo]／L2．5二羟基苯 甲酸(2，5DHB)，100mmol／L芥子酸 (sA)，30mrnol／L 口一CN一4羟基肉桂酸(ACHc)． 1．2 仪器与原理 LDI17001~激光解吸／电离飞行时问质谱仪，原LinearScientific公司产品．激光解吸／ 收稿 日期联系^：剂．嘏莹．第一作者：郝春雁，女．27岁，博士研究生 ·国家 中医药管理局资助谋胚． 维普资讯 郝春雁等：糖的基质辅助教 解吸／电离质谙 (MALDl—Ms)研究 电离飞行时间质谱是激光解吸／电离技术与飞行时间质谱仪的结合．即用某一波长(337nm) 的脉冲激光束辐照结晶于样品靶上的被分析物，使其解吸／电离，并根据离子在无场区飞行 一 定距离所用时间正比于其质荷 比的平方根，用能够瞬时记录谱图的飞行时间质谱仪进行质 量分析． L3 实验方法 将糖样溶于一次蒸馏水，配制成浓度10tzmol·L 棉子糖、水苏糖、葡聚糖(T40、TT0) 的待测溶液；将2mg上