CTGF-整合素β1受体信号途径在PASMC增殖、迁移和细胞外基质沉积中的作用.pdfVIP

胞外基质沉积中的作用 摘要 目的：1．探讨整合素pl受体在CTGF促进PASMC增殖、迁移、 细胞骨架变化和细胞外基质分泌中的作用机制。2．初步探讨CTGF． 整合素p，受体信号途径在肺动脉高压肺血管重构中的作用。方法： 1．分离并培养SD大鼠肺动脉中膜平滑肌细胞，实验使用37代细胞； 24h，采用Transwell小室检 +整合素pl抗体(15mg／L)孵育PASMC 孵育PASMC 12h和24h，采用考马斯亮蓝R250染色和激光共聚焦显 72h，采用 RT-PCR检测整合素pl抗体对CTGF促进CollagenI一0【l、Collagen mRNA表达的影响；并采用蛋白质印迹检测整合 III．仅1、Fibronectin．1 号调节激酶1和2(ERKl／2)的磷酸化水平，并研究整合素p1抗体 1 24h、48h、72h、 素13l抗体(O、5、10、15mg／L)同时孵育PASMC PASMC增殖有明显抑制作用(尸O．01)，并呈现一定的浓度依赖性，其 24h后，CTGF 测结果显示，以整合素pl抗体(15mg／L)封闭PASMC 刺激的细胞迁移受到明显抑制(尸0．01)。3．考马斯亮蓝R250染色观察 细胞骨架变化结果发现，24h时，各组之间细胞骨架变化不明显；在 12h时与对照组比较，CTGF组能短暂改变细胞形态；使用整合素13l 抗体后，CTGF所引起的细胞形态变化不明显。同时采用激光共聚焦 扫描显微镜观察胞内FAK的变化结果发现，12h时，细胞形态及胞 质内绿色荧光变化不明显。而CTGF作用PASMCs24h可见细胞形 态缩小，胞质绿色荧光(FAK)减弱，分散。但整合素pl抗体作用 24h后细胞形态与正常组相近。4．RT-PCR检测结果显示，与对照组 比较，CTGF显著促进I型胶原．0【1、III型胶原．al和纤维连接蛋白．1 mRNA表达均减少(尸O．05)。5．蛋白质印迹结果表明，与对照组比较 CTGF明显促进III型胶原蛋白表达；使用整合素13，抗体后ⅡI型胶原蛋 白表达较CTGF组减少眼0．05)，但较对照组表达增加；且整合素pl 合素pl介导了CTGF诱导的PASMC增殖、迁移和细胞骨架变化。2． I型胶原．仅l、III型胶原．IDcl、 整合素13l可介导外源性CTGF促进PASMC 纤维连接蛋白．1mRNA表达，以及介导CTGF促进ⅡI型胶原蛋白表 信号通路有关。4．整合素pl受体信号可能在CTGF介导的PASMC 增殖、迁移、细胞外基质沉积和细胞骨架改变等生物学行为中起重要 作用；CTGF．整合素受体信号途径可能参与了PAH肺血管重构。 关键词： 整合素；结缔组织生长因子；肺动脉平滑肌细胞；增 殖；迁移；肺动脉高压；细胞外信号调节激酶 TheRoleof in CTGF-integrinplSignal Proliferation， Pathway andExtracellularMatrix ofPASMCs Migration Deposition 1．To themechanismsof on Abstract：0bjectiveexplore integrinpl CTGF-induced