6肿瘤细胞培养和杂交瘤技术1.pdfVIP

肿瘤细胞的培养 姚 娟 安徽医科大学微生物学教研室 1 肿瘤细胞在组织培养中占有核心的位置，当前 建立的细胞系中癌细胞系是最多的。 肿瘤细胞培养是研究癌变机理、抗癌药检测、 癌分子生物学极其重要的手段。肿瘤细胞培养 对阐明和解决癌症将起着不可估量的作用。 2 主要内容 体外培养肿瘤细胞的特征 肿瘤细胞系的建立 体外培养肿瘤细胞生物学检测 肿瘤细胞体外培养的应用 3 一、体外培养肿瘤细胞的特征 肿瘤细胞与体内正常细胞相比，不论在体 内或在体外，在形态、生长增殖、遗传性状等 方面都有显著的不同。 4 1、形态 培养中癌细胞无光学显微镜下特异形态，大多 数镜下观察比二倍体细胞清晰，核膜、核仁轮 廓明显，核浆比例大。 电镜观察癌细胞表面的微绒毛多而细密，微丝 走行不如正常细胞规则。 5 2 、生长增殖特点 （不受控增殖性） 失去接触抑制，细胞能相 互重叠向三维空间发展， 形成堆积物。 失去锚着依赖性（停泊依 赖性），可在琼脂、甲基 纤维素等支撑物上生长。 6 低血清要求，2%~5%血清仍能生长，成为 检测细胞恶变的一个指标。 不依赖生长因子，因其可自分泌产生促增 殖因子。 形成集落（克隆）的能力比正常细胞强。 7 3 、永生性 永生性也称不死性。在体外培养中表现为细胞 可无限传代而不凋亡。体外培养中的肿瘤细胞 系（株）都表现有这种性状。 永生性和恶性（包括浸润性）是两种性状，受 不同基因调控。从一些具有永生性而无恶性的 细胞系，如NIH3T3 、Rat-1 、10T1/2等细胞可以 证明。 8 4 、致瘤性 细胞接种同种动物或裸鼠后的致瘤性是客观反 映细胞恶性程度的指标。 具体做法是： 1）收集培养的肿瘤细胞，用无血清培养液洗一遍；2 ）计数 6 7 后将0.2ml含2 ×10 ～2 ×10 个细胞的细胞悬液注射到动物皮下。 约一个月左右（最短在3天后），可见注射局部有肿瘤出现，甚至 有转移瘤形成。经病理组织学检查可以确定肿瘤是否由接种的细 胞产生。也可接种到腹腔或通过鼠尾静脉注射。 9 5 、浸润性 浸润性是肿瘤细胞的扩张性增殖行为，培养癌 细胞仍持有这种性状。 在与正常组织混合培养时，能浸润入其它组织 细胞中，并有穿透人工隔膜生长的能力。