饲料中17种氨基酸的测定.pdfVIP

应用报告 LC013 饲料中17 种氨基酸的测定 氨基酸是动物的生长发育及动物体内营养物质的正常代谢所必须的重要组 分，因此是评价饲料营养成分的一类重要指标，准确检测氨基酸的含量和种类对 于饲料质量评价和控制具有重要意义。本文采用柱前衍生法，可同时对饲料中的 17 种氨基酸进行分析测定。 一、实验部分 1.1 仪器与试剂 LC1620A 高效液相色谱仪（含UV 检测器1 台，P 1620A 高压恒流泵2 台，上海 舜宇恒平科学仪器有限公司） FA2004 电子分析天平 恒温箱 水解管（5 型） 旋涡混匀器 氢氧火焰机 乙腈(色谱纯，沃凯) 氨基酸标准品溶液（上海月旭） 超纯水 2 ，4-二硝基氟苯 （DNFB ）、N,N-二甲基酰胺、浓盐酸、磷酸二氢钾、碳酸氢钠、 氢氧化钠、冰醋酸 （均为分析纯）。 1.2 标准品溶液配制 1）氨基酸标准品溶液：氨基酸标准品溶液用水稀释10 倍到所需浓度 （见表1）。 2 ）衍生化缓冲液的配制：称取21g 的NaHCO3 于 1L 烧杯中，加水470mL，摇 匀、溶解。过滤至500mL 试剂瓶中，再加乙腈30mL，摇匀即得。 3 ）衍生化试剂：取1mL DNFB 加入100mL 定量瓶中，乙腈定容至刻度即得。 4 ）平衡溶液的配制 ：取KH PO 3.4g ，加0.1mol/L 的NaOH 溶液145.5mL，加 2 4 水至500mL，摇匀，过滤，贮存置棕色瓶中即得。 5 ）6mol/L 盐酸：取浓盐酸500mL 加入1L 烧杯中，再加水500mL，摇匀即得。 表1 十七种氨基酸浓度表 名称 简写 MW C(mmol/L) 名称 简写 MW C （mmol/L） 天冬氨酸 Asp 133.10 0.25 蛋氨酸 Met 149.21 0.25 谷氨酸 Glu 147.13 0.25 半胱氨酸 Cys 121.15 0.125 丝氨酸 Ser 105.09 0.25 异亮氨酸 Ile 131.17 0.25 精氨酸 Arg 174.20 0.25 亮氨酸 Leu 131.17 0.25 甘氨酸 Gly 75.067 0.25 苯丙氨酸 Phe 165.19 0.25 苏氨酸 Thr 119.12 0.25 组氨酸 His 155.15 0.25 脯氨酸 Pro 115.13 0.25 赖氨酸 Lys 146.19 0.25 丙氨酸 Ala 89.093 0.25 酪氨酸 Tyr 181.19 0.25 缬氨酸 Val 117.15 0.25 - - - - 1.3 色谱条件： 色谱柱：Welch unitary Amino acid 柱 （4.6 ×250mm，5um ） 流动相：A ：40mM 乙酸钠缓冲液（冰醋酸调pH 调至6.5 ）（含10mM N,N-二甲 基酰胺）B ：乙腈：水=1 ：1，梯度洗脱（见表2 ） 流速：1.2mL/min 柱温：28 ℃ 波长：360nm 进样量：10ul 表2 梯度程序表 No. 时间(min) 流动相(A %) 流动相(B %) 1 0 84 16