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- 2018-05-13 发布于江苏
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课题2多聚酶链式反应扩增DNA片段
PCR扩增的原理和过程 [自读教材·夯基础]
1.细胞内DNA复制的条件
原料 4种脱氧核苷酸 模板 2条DNA母链 酶 解旋酶和DNA聚合酶 引物 使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸 2.PCR扩增的原理及条件
(1)PCR技术:即多聚酶链式反应,是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。它能以极少量的DNA为模板,在短时间内复制出上百万份的DNA拷贝。
(2)引物:DNA聚合酶不能从头开始合成DNA,而只能从3′端延伸DNA链,因此,DNA复制需要引物。
(3)扩增方向:总是从子链的5′端向3′端延伸。
(4)原理:DNA的热变性原理,即:
双链DNA单链DNA
(5)条件
3.PCR的反应过程
(1)过程:
(2)结果:DNA聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间的DNA序列,使这段固定长度的序列呈指数扩增。
1.DNA复制时为什么需要引物?
提示:DNA聚合酶不能从头开始合成DNA,而只能从3′端延伸DNA链。
2.PCR扩增DNA过程中是否还需要解旋酶?
提示:不需要。
3.PCR缓冲液相当于细胞内的什么成分?
提示:因为缓冲液为DNA的复制提供场所,相当于细胞内DNA复制的场所,所以缓冲液相当于核基质。
4.PCR循环之前,常要进行一次预变性,预变性的目的是什么?
提示:预变性的目的是增加大模板DNA彻底变性的
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