第二章_胚胎培养.ppt

第二章 胚胎培养 本章重难点 胚培养的意义 离体胚培养时，胚的发育有以下几种可能性途径 胚培养的影响因素 胚乳培养的影响因素 概念：看护培养 一、胚培养的意义 1、克服远缘杂交不亲和性和杂种不育性，获得种间或属间杂种 在很多种间和属间杂交中，受精作用能正常完成，胚也能进行早期的发育，但由于胚乳发育不良，杂种胚最终将会夭折，因而不能形成有发芽能力的种子 倍性不同种属杂交 2.获得单倍体植株 单倍体的产生方法很多，通过远缘杂交，结合胚培养技术是获得单倍体的有效方法之一 球茎大麦技术培育大麦单倍体 单倍体胚生长缓慢，受精后2－5天胚乳自然解体，自然条件下很难获得大麦单倍体 幼胚剥离进行胚培养 3.克服种子休眠，提早结实 植物休眠从几天到几年不等。某些园艺植物如落叶树的育种和繁育工作因种子休眠期太长而受到影响 通过胚的离体培养，可使休眠期缩短 苹果属的一些品种，种子播种后在土壤中需几个月才能萌发，离体培养的胚却能在48h萌发，4周内形成移植幼苗，5个月的幼苗长达1m高 4.缩短育种周期，提高育种效率 在育种实践中，为了加快育种进程，可采用离体胚培养的方法 例如蔷薇属植物的栽培品种常需1年才能开花。从离体培养胚获得的幼苗只需2－3个月即可开花，而利用这种花作父本，1年内可产生2个世代，大大地提高育种进程 5、种子生活力的快速测定 应用一般的萌发试验测定休眠的种子生活力所需时间很长，必须要预先进行后熟处理 Tukey（1994年）发现未后熟的种子和后熟的种子的胚在离体培养条件下的发芽速度相同 与染色法相比，离体胚培养技术对于种子生活力的检测更可靠和更精确 6.稀有植物的繁殖(使种子无生活力或胚发育不全的植物获得后代) 许多落叶果树的种子是早熟的,种子往往不育。用胚胎培养可以将不能正常萌发的种子培养出第二代植物。 兰花、天麻的种子成熟时，胚只有6-7个细胞，多数胚不能成活。如在种子接近成熟时，把胚分离出来进行培养，就能生长发育成正常植株。 二、胚培养技术 胚培养 成熟胚培养：子叶期后至发育完全的胚 幼胚培养：子叶期以前的具胚结构的幼小胚 操作过程： 取材和消毒 胚的剥离 接种 （看护）培养 三、胚培养的影响因素 1、胚龄：一般说来，胚龄大小与成活率成正相关 离体胚培养时，胚的发育有以下几种可能性途径： （1）胚胎发育途径：幼胚经过心形期，再发育到鱼雷形期，进而进入子叶期，最后萌发成苗。这是幼胚培养成功的途径。 （2）早熟萌发途径：幼胚从心形期发育到鱼雷形期后，不经过子叶期直接发育成苗，即跳过某一个发育阶段，这样的幼苗往往很弱小，组织不健全，且难于培养成正常的植株。 4、胚柄的作用 胚柄小而易受损伤，很难把它与胚一起剥离出来，因而在一般情况下培养的胚都不具完整的胚柄 胚柄的存在对于幼胚的存活是个关键因素 Cionini等（1976）发现，成熟红花菜豆胚的胚柄完整与否对于胚的培养无显著影响，而在幼胚培养中，去掉胚柄就会显著降低成苗频率 Yeung等（1979）指出，与无胚柄的胚培养相比，若胚柄完整地连在胚上会显著刺激胚的进一步发育 胚柄作用机理 胚柄促进生长作用在胚胎发育的心形早期最明显。这种促进作用是由于胚柄含有较高的赤霉素有关 除掉胚柄时对胚所引起的损伤也是造成无胚柄胚难于成功培养的原因之一 Monnier（1978）曾发现，无胚柄的荠菜幼胚在胚柄与胚连接点附近的胚根原区域会出现细胞坏死的现象 第二节 胚珠培养 成熟胚很小时，胚培养难以成功，采用胚珠培养较易成功 Maheshwari将授粉5天的罂粟胚珠（仅为合子胚或只有2个细胞的原胚）进行离体培养，得到种子。 对未受精的胚珠进行培养可诱发大孢子发育成单倍体植物 在棉花种间杂交中，通过胚珠培养可以防止由于棉铃脱落丧失杂种胚 研究棉花的纤维发育 研究案例棉花纤维表达谱分析 1、研究背景 棉花纤维是目前发现的最长的单细胞，是研究细胞伸长的最理想材料 2、研究方法 材料：徐州142及其光子突变体 提取5－10DPA的纤维RNA，合成cDNA后克隆到质粒载体、测序 实验结果 测序36000个cDNA获得12233个unique EST cDNA microarray表明2522个基因在纤维伸长中发挥作用 Microarray 芯片 采用高速打印或光刻合成技术同时将大量的探针分子(cDNA、EST或基因特异性的寡核苷酸)固定到固相支持物(硅片、玻璃或尼龙膜)上，制造成DNA微阵列 样品DNA或mRNA通过PCR扩增、体外转录等技术掺入荧光标记分子 同微阵列杂交后通过荧光扫描仪器扫描及计算机分析对样品DNA的序列信息进行高效的解读和分析 第三节 胚乳培养 二、影响胚乳培养的因素