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动物细胞工程 1、动物细胞的培养过程 思考讨论: 1、在动物细胞培养过程中,为什么要用胰蛋白酶对取出的动物组织进行处理?用胃蛋白酶可以吗? 2、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗?为什么? 2、有关概念 原代培养:从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。 传代培养:将原代细胞从培养瓶中取出,配制成细胞悬浮液,分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养,称为传代培养。 有关概念 动物细胞生长的特征 细胞贴壁 接触抑制 无菌无毒的环境:加一定量抗生素和定期更换培养液 营养 温度和pH 气体环境:95%空气+5%CO2 植物组织培养和动物细胞培养的比较 二、动物体细胞核移植技术: 将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中,使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育成动物个体。 用核移植的方法得到的动物称为克隆动物 动物细胞融合 细胞融合与融合诱导细胞融合物质 二、单克隆抗体 B淋巴细胞与抗体 单克隆抗体 如何大量生产单克隆抗体? 利用淋巴细胞产生抗体的功能 利用肿瘤细胞无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞 植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较 1.B淋巴细胞受抗原刺激后,可以产生抗体。 2.动物体内的B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体,每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。 3.每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。 由单个B淋巴细胞经过无性繁殖(克隆),形成基因型相同的细胞群,这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 特点: 特异性强、灵敏度高 单克隆抗体制备过程 注射抗原 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合、筛选 杂交瘤细胞 细胞培养 筛选,继续培养 足够数量的、能产生特定抗体的细胞群 体外培养 注射到小鼠腹腔 单克隆抗体 思考: 1、本过程利用了哪些原理? 免疫原理,细胞融合原理和动物细胞培养原理 2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合? 这样融合成的杂交瘤细胞,继承了双亲细胞的遗传物质,不仅具有B细胞分泌抗体的能力,而且还有无限增殖的本领,因而可以获得大量单克隆抗体 单克隆抗体的应用 与常规抗体相比,单克隆抗体产量高,特异性强,灵敏度高,优越性十分明显。 应用主要有: 1、临床诊断 2、作为载体,运载抗癌药物,形成“生物导弹”治疗肿瘤 资料:目前世界各国已经研制出数以百计的单克隆抗体。许多缺乏良好诊断手段的传染病、免疫性疾病、血液病、内分泌疾病和遗传病,用单克隆抗体作为诊断手段,是一个必然趋势。另外,用单克隆抗体做体内诊断,借以鉴别和定位体内“病灶”也引起人们的注意,目前,主要用于肿瘤追踪及心肌梗塞的诊断。 制备单克隆抗体 获得杂种植株 用途 物理、化学方法(同左) 灭活的病毒 物理(离心、振荡、电刺激) 化学(聚乙二醇) 诱导方法 使细胞分散后诱导细胞融合 去除细胞壁后诱导原生质体融合 细胞融合的方法 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性、 细胞融合原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 * * 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体技术 核移植 动物细胞工程常用技术 一、动物细胞培养 1.发展历史: 20世纪初,人们不知道神经纤维是由神经细胞的细胞质向外突出形成的,还是由神经细胞周围的其他细胞融合而成的。生物学家们就这个问题展开了激烈的争论。1907年,美国生物学家哈里森(Harrison)从蝌蚪的脊索中分离出神经组织,把它放在青蛙的凝固的淋巴液中培养。蝌蚪的神经组织存活了好几周,并且从神经细胞中长出了神经纤维。哈里森的实验不仅解决了神经纤维的起源问题,而且开创了动物组织培养的先河。此后,在许多科学家的不懈努力下,动物组织培养不断改进并逐渐发展成为动物细胞培养。 皮肤烧伤,如果创面很小(不大于硬币)只要保持清洁,甚至深度烧伤,也可能自愈。如果下层真皮受损面积较大,常常需要植皮。植皮需要的健康皮片。植皮需要的健康皮片,可以取自烧伤病人自身未烧伤的部位(自体植皮),也可取自其他活人或尸体(异体植皮)等。自体植皮是永久性的,取自其他人或动物的植皮是暂时性的,是在创面愈合过程中为保护创面而采取的措施,10~14天后就要被身体排斥。 如果一个大面积烧伤的病人来说,自体皮肤有限,其他渠道的皮肤来源不足。如何才能获得大量的自体健康皮肤? 2、动物细胞培养的应用和概念: 动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖. 幼龄动物 取动物器官 和组织 剪碎组织
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